配位化学——锌酶(C9组).pptVIP

锌 酶  指导教师 施 展 C9组 田鸿儒 李建明 李 闯 李军旗 陈朋宇 * 内容提要： 1 锌酶基本概念 2 碳酸酐酶 3 羧肽酶 4 碱性磷酸酯酶 * 定义： 含有锌原子的酶类，其中锌原子一般都位于酶的活性部位（包括催化位点和结合位点），其作用是：有的直接参与酶的催化反应，有的则不直接参与，而是起到稳定酶-底物复合中间体结构等作用，前者如碳酸酐酶中的锌，后者如醇脱氢酶中的锌。 性质： 作为辅因子，锌完全以Zn2+形式存在，不同于铜、铁、锰等，无氧化还原能力（d10电子结构），并且具有良好的Lewis酸性和溶解性，杂化方式为sp3，配位数为4，通常形成四面体型配位化合物。 * 表-1 一些常见的锌酶 锌酶 相对分子质量 （×103） 锌原子个数 来源 生物功能 碳酸酐酶 28～30 140～180 1 6 哺乳动物红细胞 植物 CO2的可逆水合 羧肽酶 34～36 1 哺乳动物胰脏 肽链C-末端氨基酸的水解 氨肽酶 300 4～6 猪肾 肽链N-末端氨基酸的水解 碱性磷酸酯酶 89 4 大肠杆菌 磷酸单酯的水解 醇脱氢酶 8 4 马肝 氧化醇成为醛 * Ⅰ 碳酸酐酶 1933年发现，能够催化CO2的可逆水合，因而被命名为碳酸酐酶（carbonic anhydrase，CA），1940年确定其中含有Zn2+，并且证明Zn2+在该酶的催化过程中不可缺少，广泛存在于绝大多数生物体内，催化的反应为 CO2 + H2O HCO3- + H+ 酶存在，pH=9，25℃条件下，反应速率约为106M/s；无酶时同条件下只有7.0×10-4M/s。由此可见，碳酸酐酶中的Zn2+在催化CO2水合的反应中起到的不可替代的作用。 * 图-1 碳酸酐酶及活性部位Zn2+周围的结构 （a）碳酸酐酶 （b）活性部位Zn2+周围的结构 * Zn2+催化CO2水合的作用原理： 研究方法与手段： 锌酶一般为无色，难以用谱学方法对其深入研究。采用化学方法将天然碳酸酐酶中的Zn2+用Co2+取代，因为四配位高自旋的Co2+有与天然碳酸酐酶中Zn2+相似的扭曲四面体的配位构型，而电子构型为d7的Co2+有较为丰富的谱学性质。具体做法是先用化学方法除去天然碳酸酐酶中的Zn2+得到脱辅基蛋白（apo-protein），后者再与Co2+结合得到Co2+取代的碳酸酐酶[Co2+-CA]。 碳酸酐酶CA 脱辅基蛋白（apo-protein） Co2+-CA -Zn2+ +Co2+ * 然后通过测定在不同pH值下Co2+-CA的紫外可见光谱，推测不同pH值下Co2+的配位环境及配位物种等。结果显示，在低pH值（酸性）时， Co2+趋向于五配位； pH值逐渐增高，碱性增强时就会失去1个配位H2O， Co2+变为四配位；pH值再高时，与Co2+配位的另一个H2O也会失去一个H+，从而形成Co2+-OH-。失去H+时的pH值的大小反映了与Co2+配位的H2O的pKa的大小。该过程可用图-2表示如下： * 图-2 Co2+-CA中Co2+的配位环境及物种随pH值的变化 * 由以上推测，天然碳酸酐酶催化CO2可逆水合反应的活性物种为Zn2+-OH-。现已证明，天然碳酸酐酶中与Zn2+配位的H2O的pKa约为7，即在几乎中性条件下即可发生Zn2+-OH2—→ Zn2+-OH-+H+，也就是说，由于Zn2+的参与大大降低了配位H2O的pKa。 结论： 碳酸酐酶催化CO2可逆水合的反应过程是，首先活性物种Zn2+-OH-进攻CO2中的碳原子形成如图3所示的中间体，之后脱去HCO3-，同时Zn2+再结合一个H2O，从而完成一个催化循环。 * 图-3 天然碳酸酐酶催化CO2可逆水合反应的反应中间体 * Ⅱ 羧肽酶 生物体系中催化肽链水解的酶主要有两类：催化肽链C-末端氨基酸水解的羧肽酶（carboxypeptidase，CP）和催化肽链N-末端氨基酸水解的氨肽酶（aminopeptidase）。其中羧肽酶催化的反应如下： R-CO-NH-CHR＇-CO2- + H2O R-CO2- + H3N+-CHR＇-CO2- 如果R基团含有芳香基团，则称选择性水解这类反应的羧肽酶为羧肽酶A（CP-A）；如果R基团为碱性基团，则称之为羧肽酶B（CP-B）。 * 其中来自牛胰腺的羧肽酶A研究得比较清楚，其蛋