卵巢癌中redd1的表达与ras突变及与pi3kakt信号通路的相关性研究-study on the relationship between red d1 expression and ras mutation and pi 3 kakt signaling pathway in ovarian cancer.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 摘 要1 AbstractII 英文缩略词表 Ⅲ 前 言1 材料与方法 3 1 材料3 1.1 病例收集3 1.2 主要试剂、耗材3 1.3 主要仪器设备5 2 方法6 2.1 临床病理学研究方法和内容6 2.2 肿瘤组织 DNA 提取、PCR 扩增 6 2.3 免疫组织化学染色9 3 统计学分析11 结 果12 1. 118 例卵巢肿瘤患者的基本信息12 1.1 患者的临床病理分析12 1.2 病理组织学观察13 2．KRAS 基因突变检测结果 15 2.1 KRAS 基因扩增产物电泳检测 15 2.2 KRAS 基因突变测序图 15 2.3 KRAS 基因突变类型和分布区域 17 2.4 KRAS 基因突变与临床病理特征的关系 18 3. 免疫组织化学染色结果19 3.1 p-AKT 在卵巢癌组织、交界性肿瘤和正常上皮组织中的表达 19 3.2 p-AKT 表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系 19 3.3 p-AKT 蛋白表达与卵巢癌患者化疗抵抗呈正相关 20 3.4 p-AKT 蛋白表达与卵巢癌患者预后差相关 20 3.5 卵巢癌组织中 p-AKT 的表达和 REDD1 的表达呈正相关 20 讨 论24 1. 卵巢癌流行病学概况24 2. 卵巢癌的组织起源问题24 3．KRAS 基因的研究 25 3.1 KRAS 基因的简介 25 3.2 KRAS 基因突变与卵巢肿瘤的研究 26 HYPERLINK \l _TOC_250001 4. REDD1 基因的研究 27 4.1 REDD1 基因的简介 27 4.2 REDD1 基因与 KRAS 基因突变的相关性分析 27 HYPERLINK \l _TOC_250000 5．p-AKT 蛋白功能的研究 28 5.1 p-AKT 蛋白在卵巢癌组织的表达 28 5.2 REDD1 和 p-AKT 蛋白表达的相关性研究 28 6．问题与展望29 结 论30 参考文献31 文献综述35 附 录44 致 谢48 作者简介50 导师评阅表 51 摘 要 目 的： 前期研究成果证明在 Ras 转化的人类卵巢癌上皮细胞系中 REDD1 高表达，REDD1 是 Ras 介导的卵巢上皮细胞恶性转化所必须的关键因子。PI3K/AKT 信号通路在人类多种恶性肿瘤可被激 活，在肿瘤发生发展、侵袭转移及放化疗抵抗中发挥重要作用。本研究在此基础之上，继续探讨新 癌基因 REDD1 在卵巢癌组织中的表达与 Ras 突变及与 Ras/PI3K/AKT 信号通路激活的关系，探讨 Ras 突变是否可诱导 REDD1 高表达以及 REDD1 高表达是否通过联合 AKT 磷酸化作用参与卵巢癌 发生。分别检测 REDD1 和 p-AKT 在卵巢癌组织中的表达，探讨二者的相关性，并分析 p-AKT 的表 达与卵巢癌的临床病理特征以及预后的相关性。 方 法：收集卵巢癌组织标本 95 例，交界性肿瘤 23 例，正常卵巢表面上皮和输卵管组织 18 例。采 用 PCR 及直接测序的方法检测 KRAS 基因突变；采用免疫组化染色的方法检测卵巢癌组织中 REDD1 和 p-AKT 的表达；统计分析 KRAS 突变与 REDD1 高表达的相关性，REDD1 高表达与 p-AKT 的相 关性；分析 p-AKT 表达与患者临床病理特征（分期、分级、化疗反应等）的关系以及与无瘤生存期 和总体生存期的相关性，分析 p-AKT 高表达是否影响卵巢癌患者的预后。 结 果：（1）选取 82 例卵巢癌组织进行 KRAS 基因突变检测，11 例检测到 KRAS 基因突变，突变率 为 13.4%；18 例卵巢交界性肿瘤，4 例检测到 KRAS 基因突变，突变率为 22.2%；9 例正常上皮组织 中，1 例检测到 KRAS 基因突变，突变率为 11.1%；KRAS 基因突变与卵巢癌组织学分级相关，即高 分化癌 KRAS 基因突变率显著高于低分化癌（p=0.002）。（2）REDD1 的高表达与 KRAS 基因突变无 显著相关性（p=0.330）。（3）卵巢癌组织中 p-AKT 高表达率为 55.8% (53/95)，均高于卵巢正常上皮 组织(16.7%)和卵巢交界性肿瘤组织(13.0%)（p0.05）。（4）p-AKT 蛋白的高表达与卵巢癌的分化程 度低、临床晚分期相关，且在浆液性癌中的高表达率高于其他组织学类型，但与有无腹水形成无显 著相关性（p﹥0.05）；p-AKT 在化疗无效组患者中的表达高于有效组（P=0.002）；p-AKT 蛋白高表 达患者的总体生存期和无瘤生存期低于低表达者（P0.05）。（5）卵巢癌中 p-AKT 的表达和 REDD1 的表达呈正相关（C=0.626，P=0.005）。