20141104_肾功能及早期肾损伤检验.ppt

（一） 肌氨酸氧化酶法 原理： 肌酐+H2O 肌酸 肌酸+H2O 肌氨酸 + 尿素 肌氨酸+O2 甘氨酸 + 甲醛 + H2O2 H2O2 +4-氨基氨替吡啉 + 色原物质 有色化合物 + H2O 肌酐酶 肌酸酶 肌氨酸氧化酶 过氧化物酶 Trinder 反应 方法学评价：如何评价？干扰因素？解决办法？ 肌酐的酶法分析是解决肌酐测定中非特异性干扰的根本途径。 利用双试剂法消除内源性肌酸的影响。 Trinder反应中不同显色物质的灵敏度差异很大，胆红素和Vc的干扰可通过添加亚铁氰化钾和抗坏血酸消除或减低。 肝素等抗凝剂在常规用量下对本测定无干扰。 （二） 苦味酸速率法 肌酐与苦味酸盐碱性溶液反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物，该反应称为苦味酸反应（Jaffe反应），利用速率法排除干扰。 原理： 肌酐+苦味酸 橘红色化合物（510nm） OH- 方法学评价：最常用的方法,简便、快速不需去蛋白，但是特异性差 1. 假肌酐：一些与碱性苦味酸生成红色的物质 维生素C、丙酮、乙酰乙酸、α-酮酸、胆红素、葡萄糖、蛋白质以及头孢菌素类抗生素、强心甙、甲基多巴等 快速反应 20s 慢速反应 80-100s 2.线性范围： 2000 ??mol/L。 3.IFCC推荐方法，双波长(510nm, 600nm)监测。 25-60S 关于双波长检测 目前许多生化测定都采用双波长检测，待测物吸收峰对应的波长为主波长(?1)，另一个称为次波长(?2)。?1/?2的选择原则主要有三种模式： 主次波长选择模式1示意图 吸光度 (1) ?1取吸收峰对应的波长，而取其吸收光谱曲线的“波谷”对应的波长为?2，这样的主次波长间的光吸收差值最大，使测定灵敏度提高。 (2) ?1仍是待测物的吸收峰，但?2取等吸收点对应的波长，如图所示，等吸收点是系列不同浓度待测物的吸收光谱曲线有一交汇点，此点对应的吸光度与浓度无关。此波长选作?2可使待测物浓度只决定于?1处的吸光度高低。 主次波长选择模式2示意图 吸光度 (3) 反应中显色产物的吸收峰对应的波长为?1，而试剂空白(显色剂)的吸收峰对应的波长为?2。这样，在反应液中代谢物浓度越大，剩余的显色剂量越小，使?1与?2对应的吸光度差距拉大，从而提高了灵敏度。 吸光度 主次波长选择模式3示意图 反应前吸收曲线 反应后吸收曲线 参考范围： 肌酐酶法： 男性：59～104μmol/L；女性：45～84μmol/L 苦味酸速率法： 男性：62～115μmol/L；女性：53～97μmol/L 临床意义： 1.血肌酐测定对中晚期肾疾病的临床意义较大。 肾疾病初期血清肌酐值通常不升高，GFR1/3时才会明显升高。 肌酐值升高至176~353μmol/L时，提示为中度至严重的肾损害。 2. 增高： 各种肾病、急性或慢性肾衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎、肌肉损伤、巨人症、肢端肥大症等。 3. 降低： 进行性肌肉萎缩，白血病，贫血，肝功能障碍及妊娠。 血清尿素测定 化学法 酶法 二乙酰一肟法 酶偶联速率法 脲酶波氏比色法 （间接测定法） 尿素urea是体内蛋白质代谢的最终产物，尿素主要通过血流经肾小球滤过后随尿液排出体外。 血清尿素水平一定程度上反映了肾小球的滤过能力。 参考范围： 酶偶联法： 健康成人血清尿素：2.9～8.2 mmol/L 二乙酰一肟法： 健康成人血清尿素： 2.9～8.2 mmol/L (一) 尿素酶法 第一步：  首先利用尿素酶(脲酶)催化尿素水解生成盐铵，铵盐在碱 性条件下释放出氨。然后再用不同的方法测定铵盐或氨，在测 定过程中需防止外源性氨的污染。 原理: 脲酶 特异性高 酶偶联速率法： 第二步： 纳氏试剂显色法： 或 酚-次氯酸盐显色法： （波氏法） 或 或 电导法 铵离子使电导增加，电导增加程度与产生的铵离子浓度成正比关系 340nm 存在内源性NH3、丙酮酸、外源性NH3的干扰，采用双试剂法消除。 避免标本溶血减少血红蛋白的干扰。 酶偶联速率法为IFCC推荐方法，可采用双波长（340nm，700nm）监测。 方