和胃理气方治疗功能性消化不良作用机制实验研究.docVIP

和胃理气方治疗功能性消化不良作用机制实验研究 　　摘要：目的：观察功能性消化不良(FD)胃肠运动的变化及胃窦部P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)含量的表达。观察和胃理气方对肝胃不和型FD大鼠胃排空及肠道传输的影响，从脑肠肽浓度方面探讨其作用机制。方法：将大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和西药组。用“夹尾激怒法”制作肝胃不和型FD大鼠模型。处理7天后，以葡聚糖兰－2000为胃肠内标记物检查其胃排空功能，用免疫组化法观察胃窦部SP、VIP的变化。结果：与正常组比较，模型组大鼠胃排空率明显下降，胃窦部SP阳性产物含量显著减少，VIP阳性产物含量显著增多。与模型组相比，中西药组胃内色素相对残留率均显著降低，小肠推进度均显著提高，胃窦部SP阳性产物均明显增多、VIP阳性产物均明显减少，其余各组两两间比较无显著性差异。结论：和胃理气方能促进大鼠胃排空及小肠推进，其机制可能与调节胃窦部SP、VIP的水平有关。 　　关键词：和胃理气方；功能性消化不良；肝胃不和；胃排空；小肠推进；P物质；血管活性肠肽 　　中图分类号：R256.3 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0835-03 　　 　　功能性消化不良是消化内科最常见的疾病之一，其发病机制尚未明确，西医无特效疗法。王垂杰教授潜心研究数载，对FD的辨证施治颇有心得。自拟和胃理气方应用于临床，疗效显著。本实验就和胃理气方对FD大鼠脑肠肽的影响进行研究，从神经内分泌角度探讨其治疗机制，为临床筛选有效方剂提供理论依据。 　　 　　1实验材料 　　 　　1.1实验动物 　　SD大鼠35只，雄性，7周龄，体重为（230±20）g，由中国医科大学实验动物中心提供。 　　 　　1.2试剂 　　2％葡聚糖兰－2000（DB－2000），联星生物制药有限公司出品；P物质和血管活性肠肽试剂盒购自武汉博士德生物制品公司。 　　 　　1.3药品 　　和胃理气方煎剂，草药购自辽宁中医药大学附属医院药局，制成浓度为120％的水提取液（即1mL含生药1.2g）；西沙必利，购自辽宁中医药大学附属医院药局，西安扬森制药公司产品，配制成浓度为0.0225％西沙必利溶液。 　　 　　1.4仪器 　　80-2离心沉淀器，上海手术???械厂产品；7230分光光度计，上海分析仪器厂产品，批号：(91)量制沪。Olympus荧光显微镜：型号207199。 　　 　　2实验方法 　　 　　2.1造模方法及分组 　　将大鼠按体重随机分为正常组、模型组、中药组和西药组。正常组8只大鼠，其余各组均为9只大鼠。正常组常规饲养，将其余3组大鼠采用夹尾激怒法[1]复制成肝胃不和型FD模型。方法如下：将每组大鼠置于笼中，用尖端缠有纱布的止血钳夹住其中一只大鼠的尾巴，令其与其他大鼠撕打，间接激怒全笼大鼠。每次刺激以不破皮流血为度，持续45min。每日2次，连续7天。每天夹尾时间固定。造模期间动物自由进食及饮水。 　　 　　2.2给药方法 　　自造模结束日起，开始灌胃给药。除正常组外，模型组、中药组及西药组大鼠每天按1.2mL／100g，分别给予0.9％的Nacl溶液、和胃理气方煎剂及西沙必利溶液，共给药7天。 　　 　　3实验指标及测定方法 　　 　　3.1胃排空及肠道传输测定方法 　　给药结束后将4组大鼠处死取材。禁食不禁水12h，术前20min用2%DB-2000 0.4mL/只灌胃, 20%的乌拉坦按780mg/kg剂量腹腔注射麻醉，无菌条件下开腹，行心脏灌流，用输液管自左心室插入主动脉，先以生理盐水冲洗血液后，再以注射器灌注4%多聚甲醛体内固定。取出全胃肠，自幽门括约肌处取胃，沿大弯侧剪开，将胃内色素残留物充分洗于4mL去离子水中，3500r/min离心15min, 取上清液，以7230型分光光度计，波长620nm测吸光度为胃内色素残留量，并求出各组均值。正常组均值为100％，各组均值与其之百分比即为各样本的胃内色素相对残留率。同时分别量取幽门括约肌至2%DB-2000前沿和幽门括约肌至盲肠的距离，以两者之比为小肠推进比。取胃窦组织（含黏膜、黏膜下层和肌层）置于4%多聚甲醛液中固定。 　　 　　3.2病理 　　取胃窦组织：观察正常大鼠与模型大鼠胃黏膜表面有无糜烂、溃疡、穿孔及其它器质性改变。 　　 　　3.3胃窦部P物质和血管活性肠肽测定 　　采用免疫组化SP法。 　　3.3.1检测步骤采用免疫组化SP法染色。 　　3.3.2阳性结果判定图像分析：选取相同染色条件下的切片，每张切片于200倍光镜下随机选取视野分别观察其阳性产物的分布、染色情况，进行判断、评分。 　　标准：特别密集（4分）、密集（3分）、中等（2分