基因修饰间充质干细胞在急性心肌梗死中应用前景.docVIP

基因修饰间充质干细胞在急性心肌梗死中应用前景 　　中图分类号：R542.2 R256.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）07-0862-02 　　 　　间充质干细胞（MSCs）是一种具有多向分化潜能的干细胞,能够向中胚层起源的各类细胞分化，目前已用于急性心肌梗死的临床研究。然而MSCs在体内存活时间短，其临床疗效有待于进一步提高。现就基因修饰后间充质干细胞在急性心肌梗死中的应用综述如下。 　　1 间充质干细胞的特性 　　MSCs在特定微环境和适宜的细胞因子作用下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、上皮细胞、内皮细胞、肌肉细胞和心肌细胞等［1］。此类细胞可从骨髓、脐带血及脂肪组织中提取。由于MSCs具有多向分化和体外自我增殖特性，使其成为再生医学的研究热点。体外研究表明MSCs具有免疫调节功能，能够抑制T淋巴细胞的增殖和抗原呈递细胞的成熟，同时可调节B细胞功能，抑制炎症介质的释放［2］。MSCs在体内可使宿主的巨噬细胞发生基因重组，调节炎症免疫反应，促进白介素-10的表达，减少败血症的发生［3］。 　　由于MSCs的再生特性和免疫调节作用，使其在治疗退行性疾病、炎症疾病、免疫系统疾病具有明显优势。然而从目前临床实验结果来看，尽管MSCs移植安全性高，但其疗效不容乐观，更多学者已将MSCs进行基因修饰后用于实验研究，以便取得更好的临床疗效。 　　2 间充质干细胞的提取与表型特征 　　MSCs可从各类组织中获取，其中以骨髓MSCs研究最为深入。目前，用于分离骨髓MSCs的方法主要有两种：贴壁筛选法和密度梯度分离法。贴壁筛选法根据MSCs可黏附在培养瓶上贴壁生长的特性，将抽取的骨髓细胞直接贴壁培养，经多次换液后去掉未贴壁细胞。该方法分离后所得的MSCs纯度不高。最常用的是密度梯度分离法。从动物骨髓中抽取骨髓，利用分离液对其离心,收集位于分离液和悬浮液界面的单个核细胞层培养，通过换液和传代纯化MSCs。 　　MSCs在无诱导物的培养液中生长成纺缍状成纤维细胞样，表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD27、CD90、CD105、CD106、CD166、CD120a、CD124，而缺乏造血干细胞表面的CD34和白细胞表面的CD45标志［4］。 　　3 间充质干细胞的基因修饰 　　目前用??动物及临床实验的基因治疗多以病毒作为转染载体。尽管病毒载体对不同种细胞转染效率存在很大差异，但由于其趋向性和侵染性高，仍是应用最为普遍的载体。在人体基因治疗实验中应用最多的基因载体为腺病毒（adenovirusesAd）、反转录病毒（retroviruses RV）、慢病毒。McMahon等［5］研究表明，不同组织来源的MSCs能够被Ad、Rv有效转染。Rv载体可整合到MSCs的DNA中，促进治疗基因的持续表达。然而有报道显示Rv转染造血干细胞后造成插入诱变，使其临床应用的安全性受到质疑［6］。Ad载体虽不能整合到宿主细胞的DNA内，但在注入动物及人体后可产生细胞和体液免疫反应，且由于Ad载体不能有效整合，只能促进增殖期干细胞转基因短暂表达。最近Stender等［7］利用腺相关病毒（adeno-associated viruses AAV）低免疫原性的特点，以其为载体，成功转染MSCs，使其成为另一种可供选择的病毒载体。 　　除病毒载体外，非病毒载体的研究与开发也成为基因治疗的热点。与病毒载体不同，非病毒载体具有设计灵活、低毒性、低免疫原性、低致瘤性、易制备、可批量生产等特点。目前用于MSCs转染的非病毒载体有脂质体DNA复合物、多聚物载体、电穿孔、核转染等。Hoare等［8］利用脂质体修饰的核定位系列多肽转染MSCs发现，非病毒载体是一种有效可行的方法，可加强MSCs治疗效应。然而非病毒载体的研究尚处于起始阶段，还存在着较多未解决的问题，例如，如何克服核膜障碍、如何降低血清成分干扰、长期应用是否存在安全性问题、如何提高通过受体获取靶向性的成功率等。因此，非病毒载体仍有待于随着基础科学的进一步研究而得到不断地发展。 　　4 基因修饰间充质干细胞在动物急性心肌梗死的实验研究 　　在过去的几年中，随着对基因修饰MSCs研究的不断深入，使其在治疗癌症、神经损伤修复、骨和软骨再生、急性心血管疾患方面取得显著实验成果。 　　Mangi等［9］认为促进MSCs抗凋亡信号蛋白Akt的表达，能够提高梗死心肌的修复。在其随后的实验中，将反转录病毒转染的MSCs移植到梗死大鼠的心肌内，使其过渡表达促存活基因Akt，结果与对照组比较，可明显减少梗死心肌面积，抑制心室重构，提高左室射血功能。最初认为MSCs移植取得的治疗效益是由于其在体内分化为心肌细胞，而随后的研究显示其作用主要得益于促进抗炎症因子、促修复因子的表