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微波法提取当归中阿魏酸及HPLC测定其含量研究 　　摘要：目的：建立当归中阿魏酸的提取及含量测定方法，为当归的质量标准控制提供理论依据。方法：采用微波提取当归中阿魏酸，萃取液为80％甲醇20ml，微波萃取仅功率：为最大功率(850W)的25％；时间：恒压时间15min，总时间25min；压力值0.40MPa。采用高效液相色谱(HPLC)法测定当归中阿魏酸的含量，Hitachi 7000型高效液相色谱仪，Symmetery―C18(4.6mmX150mm，5／1m)色谱柱；拄温：35℃；流动相：乙睛一0.02tool／l磷酸=氢钾溶液(17：83，pH2.5)；流速：1.0ml／min；检测波长：322nm；进样体积20μl。结果：阿魏酸进样量在O.048～O.128μg范围内与峰面积呈良好线性关系，R=0.9998；平均回收率为100.01％，RSD＝2.41％。结论：本实验所建立的方法专属性强，准确度高，重现性好，可作为当归的质量控制方法。 　　关键词：HPLC　当归　阿魏酸 　　【中图分类号】R31　【文献标识码】A　【文章编号】1008―1879(2010)02―0011―02 　　 　　当归[Angelilea sinensis(oliv)Diels]为伞形科当归属一种多年生草本植物，是我国常用的中药之一，有活血化淤、养血调经、镇静、镇痛等功效，为妇科良药。阿魏酸为当归中的活性成分，具有较强的生理活性，有抑制胶原和ADP诱导的血小板聚集，补血养血和提高免疫力等作用，对脑细胞和血细胞减少有较好的疗效。目前，当归中阿魏酸的提取及含量测定方法研究较多，但报道结果差异较大。进一步研究该当归中阿魏酸的提取及含量测定方法可以更好的反映和控制当归的内在质量。当归中阿魏酸的提取方法主要有主要是应用冷浸过夜、超声、索式和加热回流等传统方法进行提取。因此，本文采用微波萃取并用高效液相色谱(HPLC)法测定当归中阿魏酸的含量，并进行了含量测定的方法学考察，旨在为当归的质量控制提提供理论支撑。 　　 　　 　　1　仪器和试药 　　 　　1.1　主要仪器。Hitachi 7000型高效液相色谱仪(配有L―7420UV―VIS检测器、L―7200自动进样器)；MSP―100E微波萃取仪(北京瑞利分析仪器公司)；HANNA―pH计(MAU―RITUS)；KQ―50B型超声清洗器；FAl004型电子天平(上海精科天平仪器厂)；KS―6000超声波清洗机(宁波科声仪器厂)；ZK―82A型真塑干燥箱(上海市??验仪器总厂)；电热恒温水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。 　　 　　1.2试药。阿魏酸对照品(批号：0773―9910中国药品生物制品检定所)；当归由北京同仁堂大药房购得；乙睛为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。所有试剂上HPLC前均经0.45μm的微孔滤膜过滤并超声脱气。 　　 　　2　方法与结果 　　 　　2.1　标准品溶液的制备。精密称取阿魏酸对照品15.00 mg于15 ml的容量瓶中，用甲醇―1％冰醋酸(50：50)溶解，并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为1.00 mg／ml的标准溶液，放入冰箱贮存，备用。 　　 　　2.2样品溶液的制备。精密称取当归粉末0.2g，置于微波萃取罐中，量取80％甲醇20ml，称定重量，密封。微波萃取仪功率：为最大功率(850W)的25％；时间：恒压时间15min，总时间25min；压力值0.40MPa。微波萃取后冷却至室温，补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。 　　 　　2.3色谱条件与系统适用性试验。采用Symmetery―C18(4.6mmｘ150mm，5μm)色谱柱；柱温：35*(2；流动相：乙晴―0.02too1／1磷酸二氢钾溶液(17：83，pH2.5)；流速：1.0ml／min；检测波长：322nm；进样体积20μl。在此色谱条件下，阿魏酸与其它组分能达到基线分离。 　　 　　2.4方法学考察。 　　2.4.1线性关系考察。精密吸取上述对标准品溶液40μl于5ml容量瓶中，加甲醇―1％冰醋酸(50：50)稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各6、8、10、12、14、16μ1，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以阿魏酸进样量(“g)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归分析，得回归方程：Y二一54944.1+3.392X106X，R＝0.9998，表明阿魏酸在0.048～0.128μg内具有良好的线性关系。 　　2.4.2精密度实验。精密吸取标准品溶液20μ1，重复进样5次，结果阿魏酸峰面积的RSD＝1.21％(n＝5)，表明仪器精密度良好。 　　2.4.3稳定性实验。精密吸取同一样品溶液适量，在室温下放置，于0，2，4，8，1