单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞.pptVIP

1、概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程 5、过程： 3、过程： 6、优点： 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 （一）获得抗体的传统方法 1、方法： 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。 2、缺点： 产量少、纯度低、特异性差 3、解决问题的设想: ?免疫反应过程中，每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 ?克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。 4、面临的新问题： 一个B淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的。 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答： * 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 2、原理： 膜的流动性 一、动物细胞融合 3、结果：形成杂交细胞。 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核 细胞。 4、诱导方法： 聚乙二醇（PEG）、 灭活的病毒、电激等。 细胞相互凝集 膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布 细胞膜打开 细胞发生融合 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。 7、应用： ?用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养等的重要手段。 ?最重要的用途：制备单克隆抗体 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法 问题讨论 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。 １、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 　　不能，只能得到杂交细胞 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导 问题讨论 ５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？ 　　相同，都是细胞膜的流动性 问题讨论 6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 仙台病毒 物理或 化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 主要用于制备　 单克隆抗体 获得杂种植株 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 　　 物理（离心、振 荡、电激） 化学（聚乙二醇） 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 用途　　 诱导方法 步骤　 融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 8、植物、动物细胞融合的比较 抗体是由何种细胞产生的？ 2.抗体是如何产生的？ ？ 二、单克隆抗体 . . . . 1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 问题讨论 提示： 1 .什么样的细胞可以产生抗体？ 2 . 什么样的细胞可以无限增殖？ 2、瘤细胞和癌细胞有何区别？ 共同点：两者都有无限增殖的能力 不同点：瘤细胞不能转移 1、设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 （二）单克隆抗体的制备 2、单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 （选择性培养基） 诱导其融合的方法有哪些？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 １、细胞融合后培养液中有几种细胞？ 筛选杂种细胞 思考： 杂交瘤细胞 ２、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？ 细胞融合技术、细胞培养技术 3、单克隆抗体的概念： 化学性质单一，特异性强的抗体 4、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可大量制备。 ①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） （三）单克隆抗体的应用 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如 “生物导弹”） （导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，用于治疗肿瘤） （位置准确、疗效高、副作用小） 小结 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 ——灭活病毒 一个新细胞——杂交瘤细胞 一个优势——单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势 单克隆抗体 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的