Beacon孔雀石绿检测试剂盒.docVIP

孔雀石绿/结晶紫检测试剂盒 使用说明书 适用 Beacon孔雀石绿/结晶紫检测试剂盒是利用酶联免疫吸附测定法用于食品中孔雀石绿/结晶紫的定量测定。 检测原理 酶联免疫吸附测定法定量测定孔雀石绿/结晶紫残留。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的孔雀石绿/结晶紫进行免疫测定。先将标准及样品加入到微孔中，再加入抗体。孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的分子。每孔再加入酶标记物，孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的分子。每孔中加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30分钟后停止此反应，根据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的颜色得出样品的浓度值。 特异性 Beacon孔雀石绿/结晶紫检测试剂盒能检测孔雀石绿及其相似物，它们的结合程度是不同，以下表格中展示的是相关值及交叉反映率（%CR），以下所有浓度均为ppb级。 种类 % CR 孔雀石绿 100% 隐性孔雀石绿 1% 结晶紫 250% 隐性结晶紫 1% 检测限 水产品：0.5 ppb. 提供试剂及材料 试剂盒在2-8oC贮存（不要冷冻），请于盒上标注日期前用完。 空包装微孔板 （8×12条）. 1 瓶 2mL 孔雀石绿高浓度标准液，浓度分别为 100 μg/L (ppb) . 1 瓶 1 mL 孔雀石绿酶标记浓缩物（X30）. 1 瓶 12mL 孔雀石绿抗体. 1 瓶 14 mL 底物. 1 瓶 14 mL 停止液. (注意: 1N 盐酸, 勿接触皮肤!). 1 瓶 25mL 酶标记物稀释液. 试剂a 4倍浓缩物（用于样品前处理）20mL. 试剂b （用于样品前处理）10g. 10．操作说明书. 注意事项 最好配套使用Beacon所提供的试剂，不要同其它公司的产品混用，不要将不同批次的产品混用。 样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。 不要使用过期的产品。 使用之前将所有试剂回升至室温20-280C，但不要放置超过24小时。 孔雀石绿属于抗生素，请小心处理。 停止液是1N盐酸，避免接触皮肤。 试剂盒未提供的材料 蒸馏水或去离子水. 乙腈. 量筒, 100 ml或更大. 样品萃取及收集用的玻璃器皿. 中性氧化铝,100-200目. 可吸取50ul的移液器及吸头. 可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸头. 吸水纸或相当的吸水材料. 450nm的酶标仪. 计时器. 混旋器. 洗瓶. 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸馏水定容至1000ml. 检测前所需准备试剂 试剂I 的准备：用乙腈按照1：4稀释试剂a ；例：移取试剂a 2ml到6ml乙腈中可得到8ml 所需试剂。 样品稀释液的准备：10ml 乙腈加入到90 ml ,20mMPBS中混合，即可得到100ml ,10%乙腈/ 20mMPBS。 酶标记物的准备：免疫测定前准备酶标记物溶液，用酶标记物稀释缓冲液按照1：30稀释30倍酶标记浓缩物。 例：移取0.2ml ,30倍酶标记浓缩物到5.8ml酶标记物稀释缓冲液中，可得到足够3个孔条的量。 标准的准备 在开始检测程序之前，用样品稀释液（10%乙腈/20mMPBS）稀释高浓度孔雀石绿标准液。在稀释之前使高浓度孔雀石绿标准液回到室温。稀释好的标准需当日使用。 取出5个干净的10ml具塞试管分别标上“0.405，0.135，0.045，0.015，0.005”样品稀释液为0标准。 配制0.405ppb标准：用玻璃微量移液器（液相或气相用）移取30ul 100ppb高浓度孔雀石绿标准溶液到已盛有7.38ml样品稀释液标有0.405的试管中。彻底混合。 配制0.135ppb标准：用移液器移取1ml已配好的0.405ppb的标准到已盛有2ml样品稀释液标有0.135的试管中。彻底混合。 配制0.045ppb标准：用移液器移取1ml已配好的0.135ppb的标准到已盛有2ml样品稀释液标有0.045的试管中。彻底混合。 配制0.015ppb标准：用移液器移取1ml已配好的0.045ppb的标准到已盛有2ml样品稀释液标有0.015的试管中。彻底混合。 配制0.005ppb标准：用移液器移取1ml已配好的0.015ppb的标准到已盛有2ml样品稀释液标有0.005的试管中。彻底混合。、 确定将试管该拧紧避免蒸发损失。 样品制备 水产品（稀释倍数：10） 称5 g 绞碎样品，除去多余水分，于50ml离心管中加入10ml 乙腈。 均质5秒钟。 3000 g 室温离心5分钟。 加入3g中性氧化铝(100-200目)。 3000 g 室温离心5分钟。 移取上清液于2ml干净离心管中，氮气吹干。 加入0.5ml 稀释好的试剂a,混合