(动物传染病学实验课件)3 细菌的药敏试验知识讲稿.pptVIP

实验三 细菌的药敏试验 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验方法和步骤 五、思考题 一、实验目的 1.了解抗生素和抗生素抗性的作用机制。 2.掌握药敏试验的原理和临床意义。 3.掌握药敏试验扩散法的实验操作。 二、实验原理 1.抗生素作用机制 ①影响细胞壁的合成，如青霉素、万古霉素； ②抑制蛋白质的合成，如四环素、氯霉素； ③作用于细胞膜，如多粘菌素、多烯类化合物； ④抑制核酸的合成，如利福平、氯喹； ⑤干扰酶系统，如大环内酯类。 抗性质粒编码β-内酰氨酶，可以破坏青霉素分子中的酰氨键从而使青霉素失活。 氯霉素与氯霉素抗性 细菌细胞的70S核糖体是合成蛋白质的主要细胞成分，它包括50S和30S两个亚基。氯霉素通过可逆地与50S亚基结合,阻断转肽酰酶的作用，从而使新肽链的形成受阻，抑制蛋白质合成（广谱抗菌）。 基因组突变导致抗生素分子不能与作用位点结合。 抗性质粒含有氯霉素乙酰转移酶，修饰氯霉素分子。 与16S rRNA结合抑制细菌蛋白质的合成。 抗性质粒编码一个蛋白泵可以将四环素分子泵到细菌细胞外面。 四环素和四环素抗性 3.药敏试验 1.稀释法：待检细菌接种于不同稀释浓度的固体或液体培养基上，测定MIC或MBC。 2.扩散法：抗菌药物置于接种细菌的固体培养基上，测定待检细菌的抑菌环。 稀释法 MIC：Minimal inhibition concentration MBC：Minimal bacteriocidal concentration 抗菌药物稀释成不同浓度 接种待测菌进行培养 测定细菌的最低抑制浓度(MIC） 或最低杀菌浓度（MBC） 精确 扩散法 接种待测菌在固体培养基上 将抗菌药物置于接菌培养基上 抗菌药物向培养基中扩散，形成浓度梯度 抑制细菌的生长，从而出现抑菌环 根据抑菌环的大小， 判定细菌对药物的敏感度 定性 三、实验材料 被检细菌: 麦氏比浊管 药敏纸片 灭菌生理盐水 培养皿和棉签 四、实验方法和步骤 细菌培养 比浊稀释 菌液涂布 贴药敏纸片 无菌操作 1.细菌培养：挑取菌落4~5个，接种于肉汤培养基中，置37℃培养6~12小时。 2.比浊：取1ml的细菌悬液，用麦氏比浊管测定浓度。 3.稀释：根据测定的浓度和终浓度（1.5亿/ml），计算出需要补加的生理盐水的量，进行稀释和矫正。