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微囊藻毒素分子印迹传感器制备与应用 　　摘 要 以邻氨基酚为单体，微囊藻毒素（MC-LR）为模板，采用循环伏安法在金电极的表面电聚合成膜分子印迹材料，制备了传感器。采用安培法对MC-LR进行检测。在制备影响条件最佳值（pH＝4.5；单体/模板＝?1.4×10.8∶1；洗脱时间 10 min）的基础上，对该传感器的线性范围、使用寿命、选择性等进行了研究，并与液相色谱方法进行对比，结果表明： 该传感器对MC-LR具有良好的选择性和灵敏度，线性范围为0.05～0.35 mg/L；加标回收率为80%～105%；检出限为7.3 　　?SymbolmA@ g/L。与液相色谱方法对比，当置信度为99%时，无系统误差。 　　关键词 微囊藻毒素； 分子印迹； 电聚合； 传感器 　　 2011-06-30收稿；2011-09-21接受 　　本文系北京市自然科学基金（No.2102015）资助项目 　　* E-mail：cuilf@th.btbu.省略 　　1 引 言 　　微囊藻毒素（Microcystins, MCs） 是一种在蓝藻水华污染中出现频率最高、产生量最大和造成危害最严重的藻毒素[1]。微囊藻毒素的种类较多，目前发现有大约80种异构体[2]，其中含量较多，存在较普遍，毒性较大的是LR， YR和RR，其中L，R和Y分别代表Leu（亮氨酸）、Arg（精氨酸）和Tyr（酪氨酸）。而MC-LR是目前已知的毒性最强、急性危害最大的一种淡水藻类毒素，是最强的肝脏肿瘤促进剂[3]。目前。检测水中MCs的常用方法有生物法、生物化学法、生物传感器法、分子信息检测技术、色谱检测技术等[4]，这些方法都有各自的不足，如高效液相色谱法预处理过程繁琐，设备昂贵等。Tong等[5]将高灵敏的电化学免疫传感器-单层碳纳米角技术（SWNHs）用于快速检测微囊藻毒素（MC-LR），并通过拉曼光谱、X衍射光谱、扫描电子显微镜、透射电镜技术进行表征。分子印迹电化学法与此生物传感器法相比，它的制备过程比较简单，无需制备MC-LR抗体；它与天然的识别系统，如酶和底物，抗体和抗原相比，具有抗恶劣环境的能力，表现出高度稳定性和长的使用寿命。 　　分子印迹技术（MIT）通过分子印迹聚合物（MIPs）对模板分子的“记忆”效应达到对目标分子的特异性选择[6]，在分离科学[7,8]，传感器技术[9] 和痕量物质富集[10]等方面有广阔的应用前景。而电聚合法制备???子印迹传感器因具有均匀、重现性好、纳米级厚度、制备简单、实验条件要求低等优点。本实验以邻氨基酚为单体，微囊藻毒素（MC-LR）为模板,采用循环伏安法在金电极的表面聚合成膜分子印迹传感器，利用K3Fe（CN）?6为印迹电极和底液间的探针，实现了对微囊藻毒素的检测。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　AUT070416型电化学工作站（瑞士万通中国有限公司）；Wsters-1525高效液相色谱仪（美国沃特世公司）；金电极（φ＝3 mm，天津艾达恒晟科技发展有限公司）；铂电极和饱和甘汞电极（江苏金坛电分析仪器厂）；KQ-400DB数控超声波清洗器（昆山动超声仪器有限公司）。微囊藻毒素MC-LR标准样品（?E-LR-C100 Microcystin-LR≥ 95%，台湾）；邻氨基酚（北京理工大学科技开发公司）；K3Fe（CN）?6（北京化工厂）； 其余试剂均为分析纯。实验室用水为去离子水。 　　2.2 金电极的预处理 　　金电极在0.3 　　?SymbolmA@ m A1?2O3粉末上抛光成镜面。依次用稀HNO3（1∶1，V/V），无水乙醇，蒸馏水超声洗涤，每次3 min。在K3Fe（CN）?6溶液中，在 　　?Symbolm@@ 0.1～0.6 V电位范围内进行循环伏安法（CV）扫描直至达到稳定，用去离子水洗净待用。 　　2.3 分子印迹传感器敏感膜的制备 　　采用三电极体系进行电聚合，金电极为工作电极。以藻毒素（MC-LR）为模板分子，邻氨基酚为功能单体，以0.10 mol/L HClO??4溶解0.065 g邻氨基酚，用0.40 mol/L NaOH调节至pH 4.50，加入4.50 mg/L MC-LR溶液。用CV法在 　　?Symbolm@@ 0.2～1.2 V范围内扫描30圈，扫描速度为50 mV/s，平衡时间为10 s。聚合膜沉积在电极的表面，用10 mL甲醇-水（4∶1, V/V）进行超声洗脱10 min，将模板分子从电极上除去，制成留有模板分子构型空穴的分子印迹聚合物薄膜。在同样条件下，与未加模板分子制备的非印迹膜电极进行对比。 　　2.4 检测方法 　　采用三电极装置：印迹传感器为工作电极，铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极。在室温条件下，将印迹电极浸入到5.