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抗莱克多巴胺多克隆抗体制备 　　摘要：为了制备抗莱克多巴胺多克隆抗体，试验通过连接剂ｂｕｔａｎｅ－１，４－ｄｉｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｙｄｙｌ ｅｔｈｅｒ把莱克多巴胺和载体蛋白ＢＳＡ和ＯＶＡ偶联成免疫抗原和包被抗原，免疫新西兰大白兔，饱和硫铵沉淀方法纯化抗体，间接ＥＬＩＳＡ法检测抗血清效价。结果通过免疫兔获得了抗莱克多巴胺的多克隆抗体。经ＥＬＩＳＡ测定，其效价为１∶１２ ８００。 　　关键词：莱克多巴胺；多克隆抗体；ＥＬＩＳＡ 　　中图分类号：Ｓ８５９．８４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1836-02 　　 　　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 　　 　　ＺHANG Ｈｏｎｇ－ｌｉｎ１，ＣHEN Ｃｈａｎｇ－ｙｕｎ１，ＺHOU Ｈｏｎｇ－ｘｉａ１，ＹU Ｘｉａｏ－ｌｉａｎ１，ＹANG Ｊｉａｎ－ｂｏ２，ＳHI Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ２ 　　（１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｘｉａｏｚｈｕａｎｇ University，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１１７１，China； 　　２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ， Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ， Ｓｈｉｈｅｚｉ ８３２０００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，China） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ＲＣＴ （Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ） ｗａｓ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ＢＳＡ ａｎｄ ＯＶＡ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ ａｎｄ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｂｕｔａｎｅ－１， ４－ｄｉｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｙｄｙｌ ether， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎing Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｈ ＢＳＡ－ＲＣＴ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｉｔｓ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｔｉｔｅｒ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ pｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＲＣＴ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｒａｂｂｉｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｉｔｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｗａｓ １∶１２ ８００． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ； ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ； ＥＬＩＳＡ 　　莱克多巴胺（Ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ，ＲＣＴ）是苯酚胺类β２肾上腺素激动剂，具有β２兴奋剂的所有功效［１－４］，其对人体危害性很大。随着克伦特罗等一类β２兴奋剂被世界各国禁止作为饲料添加剂使用［5，6］，莱克多巴胺的非法滥用日趋严重。ＲＣＴ可显著提高肥育猪的生产性能，改善饲料利用效率，显著提高猪的瘦肉率，在猪体内代谢较克伦特罗迅速而更加不易检测［7，8］。目前，欧盟和我国禁止将莱克多巴胺作为饲料添加剂使用。因此，建立快速、有效的检测方法迫在眉睫。酶联免疫吸附检测法（ＥＬＩＳＡ）是一种快速检测方法，不需要复杂的仪器设备，灵敏度高，特异性强，样品前处理简单，非常适合大量样品的检测，便于现场监控［９］。ＥＬＩＳＡ检测莱克多巴胺残留国外已有报道［6，９］，且已经有莱克多巴胺残留检测的ＥＬＩＳＡ商品化试剂盒问世。国内已有建立ＥＬＩＳＡ方法检测研究报道，但没有形成商品化的试剂盒［１０］。目前我国使用的试剂盒主要是从国外进口，价格昂贵，不利于推广使用。本试验通过连接剂ｂｕｔａｎｅ－１，４－ｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｙｄｙｌ ｅｔｈｅｒ把莱克多巴胺和载体蛋白ＢＳＡ和ＯＶＡ偶联成免疫抗原和包被抗原，然后制备抗ＲＣＴ的多克隆抗体，为莱克多巴胺的免疫检测奠定基础。 　　１材料 　　１．１试剂 　　盐酸莱克多巴胺（纯度９７．２％，南京师范大学惠赠）； ｂｕｔａｎｅ－１，４－ｄｉｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｙｄｙｌ ｅｔｈｅｒ；酶标山羊抗兔ＩｇＧ－ＨＲＰ （武汉博士德公司）。 　　１．２试验动物 　　雄性新西兰大白兔，体重１．５ｋｇ，购自南京某实验动物中心。 　　１．３主要仪器 　　酶标仪、自动洗板机（美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ）；高速冷冻离心机（美国Ｔｈｅ