利用脂质体转染技术对HeLa细胞中重组GFP进行观察2010.pptVIP

实验13、利用脂质体转染技术对HeLa细胞中重组GFP进行观察 2010.4. 实验原理 绿色荧光蛋白（GFP）是研究基因表达、细胞分化、胚胎发育、蛋白质在活体内的定位与转运的重要工具。 The Nobel Prize in Chemistry 2008 Green Fluorescent Protein, GFP pEGFP-N1 载体 EGFP是一种优化的GFP，荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。EGFP可与其他蛋白的融合表达，且在N或C端均可。 pEGFP-N2载体具有以下几方面特点： ①该质粒具有很强的复制能力，可以随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，保证了目的基因稳定表达； ②含有高效强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达； ③具有多克隆位点，便于目的基因的插入； ④该载体具有neo基因，便于筛选成功转染的细胞。 外源基因导入哺乳动物细胞的方法 1、基因片段显微注射； 2、磷酸钙法； 3、脂质体法； 4、DEAE葡聚糖介导转染； 5、电穿孔法。 仪器、材料和试剂 超净工作台、二氧化碳培养箱、荧光显微镜； 移液器、离心管、细胞培养皿、载玻片、HeLa细胞（生长在盖玻片上）； pEGFP-N2质粒、脂质体lipofectamine2000、1640培养基、小牛血清、PBS（pH7.4）、甲醇、 DAPI