乳腺增生病 癌前病变和乳腺癌中医证型与ki-67 bcl-2表达差异的相关性分析-correlation analysis of ki - 67 bcl - 2 expression differences between precancerous lesions of hyperplasia of mammary glands and traditional chinese medicine syndromes of breast can.docxVIP

参考文献14综述17附录27致谢29引言自20世纪40年代以来，乳腺癌的发病率表现出明显的增长趋势，成为女性最常见的恶性肿瘤疾病之一[1]，全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，并有50万左右的妇女死于该病。我国虽属女性乳腺癌低发国，但近20年来，随着生活方式、环境的变化和生活水平的提高、饮食结构的变化，我国乳腺癌的发病率呈明显上升趋势。目前，乳腺癌的治疗仍以手术切除为主，术后的化疗、放疗及内分泌治疗为辅助手段，虽然综合治疗的策略使患者的生存率得以明显改善，但患者的远期生活质量却很受影响。因此，越来越多的学者把研究重点转移到如何抑制乳腺癌癌前病变进一步发展为癌。乳腺癌癌前病变是乳腺癌发展过程中必经的一个阶段，“乳腺癌多阶段发展模式”指出了正常乳腺上皮细胞向恶性转化经历了增生→不典型增生→原位癌→浸润性癌的渐进过程。这一阶段在某些因素持续作用下,可以由量变到质变,进而转化为恶性肿瘤，但如果进行适当有效的干预，病变发展可能得到延缓、阻断、甚至逆转。乳腺癌的发生发展是一个多基因、多步骤、多因素积累的过程，其机制非常复杂，其中上皮细胞的增殖与凋亡失衡在此过程中扮演着重要角色。Ki－67是一种与增殖细胞相关的核抗原，位于细胞核内，在G1期开始表达，于S期及G2期表达增加，至M期达高峰，在分裂晚期很快消失，能确切反映增殖期细胞活性，是近年来认为的能有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标记物。有研究结果显示，大鼠癌前病变造模乳腺组织中，Ki-67表达阳性率从正常、普通增生、非典型增生、癌组织中呈递增趋势，不同类型乳腺组织中Ki-67表达的强度即阳性细胞阳性率也呈递增趋势，尤其非典型增生组织Ki-67表达的阳性细胞阳性率明显高于普通增生，提示Ki-67表达增强可能是乳腺癌发生的早期事件[2]。Bcl-2是一种目前公认的凋亡抑制基因,可抑制细胞的程序性死亡，降低染色体与基因的稳定性，使DNA损伤的细胞不能及时被清除而有助于肿瘤的形成。Bcl-2基因通过抑制细胞凋亡、延长细胞生存参与肿瘤发生，在肿瘤的发生发展中起一定的作用。本文应用免疫组化方法检测凋亡抑制基因Bcl-2与增殖细胞核抗原Ki－67在乳腺增生病、癌前病变及乳腺癌组织的表达情况,以揭示Bcl-2及Ki－67在乳腺癌发生、发展中的作用，并与中医证型结合起来，以期望从分子细胞及基因变化水平来解释不同证型的变化规律，以便能更好地指导中医药临床治疗。临床研究1病例来源收集2007年10月至2011年12月山东中医药大学附属医院乳腺甲状腺外科手术切除标本90例。其中乳腺增生病、癌前病变、乳腺癌患者各30例，所有的患者术前均未进行任何治疗。2诊断标准2.1西医诊断标准：乳腺增生病的组织学分类比较复杂，参考阚秀对乳腺增生病的认识[3]分为一般性轻度增生、囊肿为主型增生、腺病为主型增生、纤维腺瘤样变为主型增生和高度增生。癌前病变参考2003年WHO发布的肿瘤组织学分类[4]分为：（1）导管上皮内瘤，包括不典型导管上皮增生、平坦上皮不典型增生、导管原位癌；（2）小叶内瘤变，即不典型小叶增生和小叶原位癌；（3）周围型导管内乳头状瘤。乳腺癌参照2003年WHO肿瘤组织学分类将乳腺癌[4]分为：非特殊性浸润性导管癌；浸润性小叶癌；小管癌；髓样癌；粘液性癌等。2.2中医证型分型标准：中医学认为，乳腺增生病至乳腺癌的发生发展以肝郁肾虚、冲任失调为病之本，气滞痰凝血瘀毒结为病之标，是一个本虚标实过程。本文以乳腺癌变发病病机为研究依据，参考国家中医药管理局颁布的《中医病症诊断疗效标准》（ZY/T001.2-94），第六版中医外科学教材及相关文献，将辩证分为气滞痰凝、痰瘀互结、痰瘀毒结3个证型。⑴气滞痰凝证：乳房肿块多为单一片块，质软韧，边界尚清，活动度可；双乳、胸胁胀闷不舒，乳房疼痛肿块与情绪相关；情绪抑郁，失眠多梦，烦躁易怒或伴喉中如有物梗阻；舌红，苔白腻，脉弦滑。⑵痰瘀互结证：乳房肿块多样性，呈结节或条索样等，质韧硬，边界欠清，活动度较差，双乳刺痛，乳房疼痛和肿块与情绪不甚相关；月经延期，行经不畅或伴有血块；舌暗红或青紫或舌边尖有瘀斑，或舍下脉络粗胀、青紫。⑶痰瘀毒结证：乳房肿块表面不平，质地坚硬不移，边界不清，可伴有双乳疼痛或皮肤麻木；月经紊乱；舌暗有瘀斑，舌体胖或大，苔垢腻，脉细数或沉细涩。3.病例纳入及排除标准3.1纳入标准3.1.1符合乳腺增生病、癌前病变、乳腺癌诊断的患者。3.1.2既往未行手术、化疗、内分泌及中医药等相关治疗。3.2排除标准3.2.1凡不符合纳入标准者，或资料不全等影响统计者男性患者3..2.3合并心脑血管、肝、肾、血液、内分泌等重大疾患及精神病患者。4、研究方法4.1主要实验设备包括[OLYMPUSBX50]生物显微镜、[LEICARM2235]石蜡切片机、[ZMN-6802]漂烘处理仪、