中国药典2015年版修订概况201607课件.pptVIP

* PCR的主要步骤 1、冰浴中将各试剂依次加入一无菌0.5ml离心管中 2、调整好反应程序 3、结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或 -20℃长期保存 4、PCR的电泳检测 ????? （提取） 扩增（浓缩） （过滤） 电泳（点样） * * PCR优点： 1、准确性高，重现性好 2、不受样品形态的限制，原药材、饮片、粉末乃至中成药都可以 3、所需样品量少 4、快速、便捷 * 1、中药颗粒剂的水分 2、粒度和粒度分布 3、乙醇量测定法第一法 4、咀嚼片崩解时限 * 技术与方法的应用与实践 适用项目 HPLC UPLC GLC 鉴别 有关物质（聚合物）：杂质信息 溶出度 含量测定 高分子杂质 分子量与分子量分布 * HPLC：系统适用性要求（通则） 中国药典要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，要求达到规定的要求或满足在分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等相关规定 要求： --理论塔板数N大于规定值（按规定方法计算） --拖尾因子T应在0.95-1.05之间（以峰高定量时） --分离度R应大于1.5 --重复性：连续进样5次，峰面积的相对标准偏差不大于2.0% * HPLC：系统适用性要求（正文） 分离度 有关物质 主成分与辅料 主成分与杂质 杂质与辅料 杂质与杂质 含量测定 主成分与辅料 主成分与杂质 * 灵敏度 供试品溶液 对照溶液或对照品溶液 色谱系统 检测器与参数设置 抛弃线 HPLC：系统适用性要求（正文） * 关于色谱柱 小粒径色谱柱，提速趋势 很多方法，都没有规定具体的色谱柱规格，便于企业根据自己的实际情况，选择合适的规格色谱柱。 粒径较小的色谱柱，柱效较高，所需柱长较短，从而柱长较短，从而可缩短分析时间。同时，粒径较小的色谱柱，对操作环境与规范性的要求也更高。 等度洗脱方法，较容易进行方法转换。梯度洗脱方法，需要注意梯度表与柱长的比例关系，以及系统的梯度延迟体积转换。 * 关于流动相 液相色谱仪器对流动相的要求 与检测器匹配 脱气，过滤除去微粒 避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） 防止细菌的生长 色谱柱对流动相的要求 纯度的要求 --超纯水，或用KMnO4处理过的双蒸水 --有机溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 缓冲液的pH值，在填料的允许范围（一般2-8）内 缓冲液（盐）的浓度不要太高（≤100mM） 流动相对样品的溶解度 --调整有机溶剂和水的比例 --最好用流动相溶样 * 关于检测器——检测器的种类与作用 检测器是液相色谱仪的“眼睛” 其作用是把色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图 检测器性能的好坏直接关系到分析结果的可靠性与准确性 根据对各类物质响应的差别，检测器可分为三大类： —通用型检测器（例如：示差折光检测器） —专用型（选择性）检测器（例如：紫外检测器、荧 光检测器） —半通用型检测器（例如：蒸发光散射检测器） * 关于检测器—衡量检测器的指标 灵敏度：S=△R/△Q - △R是检测器响应值的增量 - △Q是样品量的增量 噪音：没有样品时检测器的最大输出信号 漂移：检测器在一段时间内响应值的变化 线性动态范围：最大线性响应与最小检出限之比 最低检测限：样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度 信噪比：S/N 注意：最低检测限和信噪比不是一个单纯的检测器指标。它实际上是评价整个色谱柱系统的指标，包括了色谱系统、分离机理、色谱柱内的综合性指标 * 关于检测器—HPLC各种检测器 紫外/可见光（UV/Vis）检测器 二极管矩阵（PDA）检测器 荧光检测器（FLD) 示差折光（RI）检测器 蒸发光散射检测器（ELSD） 电化学检测器（ECD) 电导检测器（COD) 质谱检测器（MS） * 关于检测器—蒸发光散射检测器（ELSD） 所有的ELSD检测器在使用时都必须考虑被测化合物的物理性质；例如：沸点、蒸汽压及熔点 温度稳定、不易挥发的化合物更容易被检测 反之；温度稳定性不好、易挥发的化合物不能被检测 化合物是否能被检测到还取决于： ELSD检测器的参数设定 色谱条件 所以ELSD检测器只是其它检测器的一个补充 * 关于检测器—蒸发光散射检测器的应用 半通用型-可检测任何比流动相挥发性低的样品 对等度洗脱条件无限制 对上柱检测的最低是ng级 可使用多种有机溶剂，包括有强紫外吸收的溶剂 对环境条件的波动不敏感 应用领域 * *