第六章分子生物学研究法下课件.pptVIP

content 1、简述原位杂交技术的原理及实验流程 2、简述酵母双杂交技术的原理及实验流程 3、简述RNAi技术的原理及实验流程 4、列举至少三种研究DNA与蛋白质相互作用 和蛋白质与蛋白质相互作用的方法 content GST融合蛋白沉降技术 利用GST对谷胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的亲 和性，从混合蛋白质样品中纯化得到相互作 用蛋白。 content content 蛋白质芯片技术 蛋白质芯片可以用来大规模筛选蛋白之间的 相互作用。将荧光标记的探针蛋白与蛋白质 芯片孵育，洗脱非特异性结合的蛋白后，可 以通过扫描芯片上的荧光点检测到稳定的相 互作用蛋白点。 content content 免疫共沉淀技术 将靶蛋白的抗体连接到固体基质上，再将可 能与靶蛋白发生相互作用的待筛选蛋白加入 反应体系中，用低离心力沉淀或微膜过滤法 在固体基质和抗体的共同作用下将蛋白复合 物沉淀到试管的底部或微膜上。 content content D.细胞内蛋白质相互作用研究 ——荧光共振能量转移法（FRET） FRET荧光能量转移有三个基本条件： 给体与受体在合适的距离（1～10 nm）； 给体的发射光谱与受体的吸收光谱有一定的重叠（这是能量匹配的条件）； 给体与受体的偶极具有一定的空间取 向（这是偶极-偶极耦合作用的条件）。 content content E. RNAi（RNA干涉）技术及其应