改性磁性微球对蛋白质纯化和细菌分离的分析-analysis of protein purification and bacterial isolation by modified magnetic microspheres.docxVIP

目 录摘要 ⅠABSTRACT III第 1 章 绪论 11.1 纳米和纳米技术 11.2 纳米材料的特征 11.2.1 纳米材料的基本效应 21.2.2 电学性能 31.2.3 磁学性能 31.2.4 光学性能 41.3 磁性纳米微球 41.3.1 磁性纳米和磁性流体的制备 41.3.2 磁性微球的表面改性 61.4 磁性复合微球在生物技术和医药领域中的应用 71.4.1 在靶向药物和基因治疗中的应用 71.4.2 在细胞分离中的应用 81.4.3 在核酸分离中的应用 81.4.4 在蛋白质分离纯化中的应用 91.4.5 细菌和病毒的磁分离 91.5 选题的意义及研究主要内容 91.5.1 选题的意义 91.5.2 本课题主要研究内容 11第 2 章 正癸酸改性磁性微球对溶菌酶的吸附研究 132.1 引言 132.2 实验部分 142.2.1 仪器与试剂 142.2.2 正癸酸磁性纳米粒子的制备 142.2.3 改性前后磁性微球的表征 152.2.4 吸附和洗脱实验 152.2.5 从蛋清中提取溶菌酶以及活力的测定 162.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定纯化结果 162.3 结果和讨论 172.3.1 改性前后磁性微球的表征 172.3.2 溶菌酶吸附的影响因素 182.3.3 溶菌酶的洗脱 222.3.4 微球的重复使用 222.3.5 鸡蛋清中溶菌酶的提取 232.4 小结 24第 3 章2,2-硫代二乙酸磁性微球微球的制备以及对溶菌酶和卵清蛋白的吸附研究... 253.1 引言 253.2.1 仪器与试剂 263.2.2 硫代二乙酸磁性纳米粒子的制备 263.2.3 改性前后磁性微球的表征 263.2.4 吸附和洗脱实验 273.2.5 鸡蛋清中溶菌酶和卵清蛋白的分离纯化以及溶菌酶活力的测定 273.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定纯化结果 273.3 结果和讨论 273.3.1 磁性微球的表征 273.3.2 溶菌酶和卵清蛋白吸附的影响因素 293.3.3 洗脱实验 333.3.4 吸附剂的再生和重复使用 343.3.5 蛋清中提取溶菌酶活力的测定 343.3.6 从鸡蛋清中提取溶菌酶和卵清蛋白 353.4 结论 35第 4 章 替考拉宁修饰磁性纳米微球的制备及对细菌的吸附分离 364.1 引言 364.2 实验部分 374.2.1 仪器与试剂 374.2.2 替考拉宁修饰磁性纳米微球的制备 374.2.3 改性前后磁性微球的表征 384.2.4 细菌显微镜直接计数 384.2.5 细菌的分离吸附 384.3 结果和讨论 394.3.1 改性前后微球的表征 394.3.2 吸光度和菌液浓度之间的关系 394.3.3 细菌吸附行为的影响因素 404.3.4 混合菌的分离 444.4 结论 45第 5 章碱性品红修饰磁性纳米微球的制备及对细菌的吸附分离 465.1 引言 465.2 实验部分 465.2.1 仪器和试剂 465.2.2 碱性品红功能性磁性纳米微球的制备 475.2.3 改性前后磁性微球的表征 485.2.4 细菌显微镜直接计数 485.2.5 细菌的分离吸附 485.2.6 检测医院被污染水中分枝杆菌的含量 495.3 结果和讨论 495.3.1 改性前后微球的表征 495.3.2 吸光度和菌液浓度之间的关系 515.3.3 细菌吸附行为的影响因素 515.3.4 混合菌的分离 555.3.5 医院废水样中分支杆菌含量的检测 565.4 结论 56全文总结 57参考文献 58致 谢 67附录：攻读学位期间所发表的学术论文目录 68摘 要纳米材料由于具有特殊的理化性能，在医药和生化领域有着广泛的应用，即利用表 面修饰的微球对蛋白质和核酸进行分离纯化、细胞分离、细菌分离检测、靶向给药等。 为了更好的实现复合微球在实际生活中的应用，纳米微球必须有良好的生物相容性、含 有丰富的官能团、很好的磁响应性，易于磁分离等特点。本文以磁珠 Fe3O4 为磁核，制 备了多种功能化的修饰纳米微球，并用于蛋白质的纯化和细菌分离。具体工作如下：1. 以沉淀法制备正癸酸改性磁性纳米微球(MNP-CPAD)，并用透射电子显微镜、X 射线衍射、红外光谱对改性前后磁性微球进行表征。将修饰微球用于溶菌酶的吸附，考 察溶液的 pH、溶菌酶的初始浓度、吸附时间、反应温度、离子强度等因素对吸附行为 的影响。结果表明：正癸酸修饰微球基本呈球形，