L—异亮氨酸分批发酵动力学模型的研究.docx

L—异亮氨酸分批发酵动力学模型的研究第3I卷第4期 2001年12月 I业微生物 IndustrimMiaobiology v0】3】N04 Dee200I L一异亮氨酸分批发酵动力学模型的研究张伟国.陈坚,伦世仪 l江南大学生物]程学院,}[苏无锡214036)摘要对黄色短杆菌L异亮氨酸高产茵XQ4(AHVAECSueSGEth—ABIleHx)分批发酵动力学模型进行了研究建立了比较合理的1异亮氨酸分批发酵动力学模型,为L一异亮氨酸补料分批发酵最优化的研究奠定基础～关键词:L一异亮氨酸;分批发酵;动力学模型:黄色短杆菌目前.国内外L异亮氨酸全部采用发酵法生产,因而发酵水平的高低基本决定了其产品的成本提高发酵水平有两条途径:一是选育优良的生产菌种;二是采用与生产菌种相匹配的最佳培养条件和控制手段.前者是建立在代谢控制理论上的菌种选育技术;后者是建立在生化工程基础上的发酵过程控制技术.国内长期以来把氨基酸发酵的研究重点放在菌种选育上,对其发酵动力学模型的研究较少,从而影响了对发酵过程的控制.以至于目前基本}:还完全依赖于手工控制本研究在对L异亮氨酸高产菌XQ一4菌体生长和产物形成不同阶段动力学和发酵数据进行分析的基础上,建立了比较台理的分批发酵动力学模型,为补料分批发酵最优化的研究奠定了基础. 1材料与方法 1.1供试菌种 L异亮氨酸高产菌XQ一4(AHVAEC.Suc SG—EthⅡAB11eHx)I 1.2培养基种子培养基(g/L):葡萄糖.25;(NH4)!s(.5; KH2P(h,L;MgSor’7HzO,05;玉米浆,40mL/l; CaC03,l0.发酵培养基(g/L):葡萄糖,50～17I1; (N卜I4)2SO4,5;K142PO4,l;MgSO4?7HO.05;玉水浆,21mL/L 1.3培养条件作者简秆:张伟国(1963～).男.博士副研究员斜面活化24h;种子在311℃下振荡培养12～ 13h.2L发酵罐中装液量为1.2L.接种量为 10%,温度控制在31～32℃,通风比1:I～3,流加氨水控制pH值,搅拌转速根据要求而定. 1.4分析方法菌体浓度:吸取02mL菌液到5mL025tool/ LHCI溶液中,摇匀,采用721分光光度计,1etn光稃,562nr/l测定OD值.所得的OD值与吸光度一一菌体干重曲线对照,计算出菌体浓度一还原糖:菲林试剂滴定法. L异亮氨酸:纸上层析法,比色定量法及氨基酸自动分析仪测定. 1.5发酵设备瑞士1NFOR2L台式发酵罐,发酵液溶氧自动显不,温度和pH自动控制. 2结果与讨论 2.1L一异亮氨酸分批发酵动力学模型 2.1.1菌体生长模型目前应用最广泛,形式较为简单的微生物生长动力学模型仍然是Monod提出的经验模型: u=警=㈩…__『i¨对XQ4菌株的动力学特性进行了研究,结果表明在底物(葡萄糖)限制的条件下.菌体生长符台 Monod方程.并且计算出…=0265h,K= 0789g/1.很明显,Monod方程是对菌体生长的简单化描第4期I业微生物第31卷述一菌体生长过程中存在高浓度底物的抑制,代射产物的反馈抑制和阻遏,营养物扩散限制而导致菌体生长迟缓等现象_3J.在分批发酵过程开始时,底物浓度均维持在较高水平,当残精浓度lt;8～l0g/1.时意昧着发酵结束,可见在分批发酵中葡萄糖对菌体生长的限制作用不可忽略不计.故不宜用Monod方程来描述分批发酵的菌体生长模型一 V = (1一)Xf11 I』式(2)为逻辑(1ogistic)模型,能很好地反映分批发酵过程中因菌体浓度的增加对自身生长存在的抑制作用,这在分批发酵中是普遍存在的当菌体浓度很低即发酵剐开始时,X比X小得多,X/X项可忽略不计,表示菌体呈指数生长;当X=X时,表示菌体停止生长.在对XQ4进行分批发酵研究时,发现菌体牛长有一最大饱和浓度;提高初糖浓度将造成苗体的比生长速率下降,这就证明了当底物浓度较高时,底物对菌体生长存在抑制作用.关于底物对菌体生长的抑制作用可用Andrews模型l来表达:～l+—. K.x(3)mKri”J一般在分批发酵中sgt;gt;K.,故式(3)可简化如下: = … X㈩抑制物的积累而引起菌体比生长速率下降可用下式来表示: = (1一alj{5J式(51中I表示抑制物的浓度结合(4)和f5)两式.得菌体的生长模型如下: — —专I_(1一amp;』)X(6)假定抑制物的浓度与菌体比生长速率的下降旱线性关系.即a望常数,又假定抑制物的生成速率与菌体的生长速率成正比.则:掣d:6dt17I… 14一一若O时,,=O为初始条件进行积分,得, =(XX.),将其代入式(6)得式(8): ,7i1Ⅱb(XXo)X一(1+abXu)(1)x【8)假定…(1+abX0)篁K,(1+abX0)/ab