不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究.doc

不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究 ◇研究原着◇ ? 6l3? 中【临『末药理学与治疗学 中国药理学会主办 CN34.12O6/R,ISSN1009.2501 2005Jun;10(6):613—616 不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究 肖梅芳,张学梅,白香,谭焕然 北京大学医学部基础医学院药理学系,北京100083; 大连大学医学院基础医学部药理教研室,大连116622,辽宁 摘要目的:通过观察不同类型糖尿病动物模型糖 原代谢的变化,初步探讨糖原代谢异常在糖尿病发 病过程中的作用方法:首先建立4种糖尿病小鼠 模型:四氧嘧啶诱导模型,STZ诱导模型,n5一STZ诱 导模型和葡萄糖激酶基因敲除模型,并对模型小鼠 血糖水平进行检测.然后测定上述动物模型肝糖原 和肌糖原的含量,并采用Westernblot方法对葡萄糖 激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄糖激酶的蛋白表 达量进行测定.结果:血糖检测结果显示各模型组 空腹血糖值均显着高于对照组,表明糖尿病造模基 本成功:除n5一STZ诱导模型外,其它模型组肝糖原 的含量均明显低于对照组.此外,与对照组比较,4 种糖尿病模型肌糖原含量均显着降低.Westernblot 结果表明葡萄糖激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄 糖激酶的蛋白表达显着降低,这可能是该模型肝糖 原含量减少的机制之一.结论:糖尿病动物模型出 现糖原代谢异常.表现为肝糖原和肌糖原减少,提示 糖原代谢在糖尿病发病过程中起着重要的作用. 关键词糖原;动物疾病模型;四氧嘧啶;链脲佐菌 素;糖尿病;葡萄糖激酶 中图分类号:R965.1 文献标识码:A 文章编号:1009—2501(2005)06—0613—04 糖原代谢是体内糖代谢的重要组成部分,体内 贮存糖原的主要组织器官是肝脏和肌肉.肝糖原是 体内血糖的重要来源,当机体需要葡萄糖或者血糖 2005.0320收稿2005—05.30修回 中国高技术研究发展计划(863计划)资助(N.108—08—08—03和 2【x】2AA2l42O1) 肖梅芳.女.硕士,研究方向:分子药理学 谭焕然.通讯作者,女,教授,研究方向:分子药理学 Tel:010.82802O04E.mail:tanlab@,O11 水平降低时,它可以迅速被动员分解入血以补充血 糖,使血糖维持glx,~恒定.肌肉中由于不存在葡萄 糖6一磷酸酶,故肌糖原不能分解为葡萄糖来补充血 糖,它主要为肌肉收缩提供能量糖原代谢的紊乱 可能会引起血中葡萄糖浓度升高,进而导致糖尿病 的发生.本研究主要以糖尿病动物模型为研究对 象,包括经典的1型糖尿病模型——四氧嘧啶诱导 模型和链脲佐菌素(streptozotoein,STZ)诱导模型,以 及2型糖尿病模型——链脲佐菌素诱导的2型糖尿 病模型(n5一STZ诱导模型)和由本室构建的肝脏特 异性葡萄糖激酶基因敲除模型,观察糖尿病动物 模型糖原代谢的改变,对糖原代谢在糖尿病发病过 程中的作用进行初步探讨,以期为糖尿病的临床防 治提供实验依据: 1材料与方法 1.1动物与试剂雄性昆明小鼠,C57BL/6J小鼠和 ICR小鼠,SPF(specialpathogenfree)级,体重18～ 22g,购自北京大学医学部实验动物中心,动物合格 证号:SCXK(京)2002—0001四氧嘧啶购自Fluka公 司(美国);链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司(美 国);罗氏血糖仪购自罗氏诊断产品有限公司(德 国);兔来源的葡萄糖激酶多克隆抗体购自Santa cⅢz公司(美国);碱磷酶标记羊抗兔二抗购自北京 中杉金桥生物技术有限公司;葡萄糖试剂盒(氧化酶 法)购自北京北化康泰临床试剂有限公司;肝糖原测 定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;NBT/ BCIP染色试剂盒购自华美生物工程公司;其余试剂 均为国产分析纯. 1.21型糖尿病小鼠模型的建立.四氧嘧啶诱 导模型的制备:昆明小鼠,6～8周,禁食12h后,以 100mg?kg～一次性尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水. 对照组尾静脉注射等量生理盐水.1周后血糖处于 ? 614? 高水平者作为糖尿病模型;STZ诱导模型的制备: C57BL/6J小鼠,6～8周,禁食12h后,一次性腹腔 注射STZ100mg?kg体重(0.1tool?L柠檬酸钠稀 释,1)H4.5),1周后空腹血糖高于16.7nmlol?L作 为糖尿病模型鼠.注射生理盐水作为对照组: 1.32型糖尿病小鼠模型的建立n5一STZ诱导模 型的建立:取5d龄ICR小鼠,腹腔注射STZ100 mg?kg..体重(0.1mol?L柠檬酸钠稀释,pH4.5), 5d后再补注STZ60mg?kg体重小鼠断乳后,给 予正常饲料喂养4周后剪鼠尾采血,用罗氏血糖 仪测血糖:腹腔注射等量生理盐水作为对照组;基 因敲除糖尿病