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与杨树次生维管组织形态建成及分化相关的LRR-RLK基因的遗传与转化研究 报告人：王蕊 指导老师：王洁华 目录 研究背景 研究现状 研究意义 技术路线 实验内容 当前进展 实验规划 研究背景 类受体蛋白激酶(LRR-RLKs）是富含亮氨酸重复序列的蛋白质分子,参与植物的生长发育,对环境刺激应答反应等多种信号传导过程。LRR-RLKs通过与配体的特异性结合来激活胞内激酶域的自磷酸化和互磷酸化活性，将胞外信号转换为胞质信号，连接动态的转录和激素调节网络，从而影响植物的生长和发育。在植物生命活动中发挥着重要功能。 研究现状 目前已知LRR-RLKs参与调节植物体内多种生理过程，其中包括微生物与植物的共生、植物病害防御、细胞生长调控以及顶端分生组织干细胞的形成等。 最新研究表明，LRR-RLKs在植物多种分生组织的形态建成及细胞分化过程中也承担着关键的调控作用。 研究意义 本课题是LRR-RLKs在植物细胞信号转导及植物发育生物学领域研究的重要补充。 为实现人为调控木本植物次生维管系统发育过程，实现木材材性改良，发展速生丰产用材林提供基础数据和理论支撑。 为深入研究影响和决定林木植物次生生长的分子调控机制，对于增强森林生态系统碳汇功能和CO2固持能力，更好地发挥森林系统的生态服务功能具有重大意义。 技术路线 与形态学变化相关基因的查找与鉴定 形态学观察 LRR-RLK基因的转化 转化子的筛选与分子鉴定 实验内容 预培养 愈伤诱导 剥离独立愈伤 芽诱导 （1）转化子的筛选 去玻璃化 诱导生根 （2）分子鉴定5#植株的阳性鉴定 marker 5-1 2 9 12 13 14 21 wt 22 23 25 26 5 6 7 8 11 18 19 20 27 28 29 30 结果：5#共23个独立转化子， 21个为阳性，2个为假阳性 17#植株的半定量结果 √ √ √ √ √ √ √ √ 结果：红色打勾的植物为挑选出的表达量较高的，共8株。 17#部分gene的RT-PCR结果 Target Sample Threshold Cycle ( C(t) ) C(t) Mean C(t) Std. Dev Target Sample Threshold Cycle ( C(t) ) C(t) Mean C(t) Std. Dev △ct △△ct 过量表达的倍数 Actin wt 20.12 20.48 0.481 17gene wt 26.55 27.00 0.618 6.52 Actin wt 20.30 17gene wt 27.70 Actin wt 21.03 17gene wt 26.75 Actin 17-6 20.55 21.15 0.602 17gene 17-6 22.06 21.69 0.328 0.54 -5.98 63Actin 17-6 21.75 17gene 17-6 21.43 Actin 17-6 21.15 17gene 17-6 21.58 Actin 17-8 21.68 21.30 0.332 17gene 17-8 21.80 21.44 0.382 0.14 -6.38 83Actin 17-8 21.14 17gene 17-8 21.04 Actin 17-8 21.08 17gene 17-8 21.48 实验进展 生根植株 DNA鉴定 半定量筛选 5# 28 已做 半定量已做筛选出9株 6# 17 已做 已做，但过量表达的效果不明显所以未筛选出 2# 31 未做 19株已做挑选出7株，其余的15株较小，还未做 17# 23 已做 已做筛选出8株植物 CDNA 1 3 4 7 9 11 12 13 15 14 16 转化阶段 光照培养、Km筛选 筛选阶段 剥离愈伤 5 长芽 3 5 芽伸长 15 15 16 10 4 15 15 已生根 20 2 2 8 15 3 16 25 30 放生根 15 18 11