利用组织培养技术快速繁育沙棘苗的研究.doc

利用组织培养技术快速繁育沙棘苗的研究 第15卷第3期 2002年9月 沙棘 HIPPoPHAE Vo1.1jNo.3 Sep.2002 利用组织培养技术快速繁育沙棘苗的研究 朱万芹,杨泽涛,张莉,李海燕. (1.辽宁省微生物研究所,辽宁朝阳】22000;2.朝阳市林业局,辽宁朝阳122000;3.朝阳市卫生学校,辽宁朝阳122000) 摘要:以沙棘常有幼芽的嫩芽为试验材料,研究了沙棘组织培养方法育苗的培养条件,结果表明,沙棘幼芽 在Ms+3号生长素o.15～o.2mg/I+2号细胞分裂素2.0mg/I+0.35活性碳培养基上增殖效果好,不定芽分 化率达到100,增殖倍数最大可达4.45倍;沙棘幼芽在1/2Ms+3号生长素0.2mg/I培养基上生根效果好.生 根率可达100. 关键词:沙棘;芽;组织培养;快速繁育 中图分类号:$793.6.08文献标识码:B文章编号:1003—8809(2002)03—0039—02 沙棘作为灌木树种,适应能力极强,抗严寒,抗 风沙耐干旱,是土壤贫瘠和沙漠化地区水土保持的 首选树种.沙棘无污染,近年来,随着沙棘产品的不 断开发,也极大促进了人们营造沙棘保护林的积极 性,沙棘逐渐成为了我国山区的一种宝贵的植物资 源,沙棘以其所独有的经济和生态上的双重优势越 来越受到广泛关注.随着西部大开发的步伐加快,山 区绿化,生态农业建设急需大量的沙棘苗木,传统的 分株繁殖,幼枝扦插繁殖已不能满足需要,组织培养 育苗法——即把离体的组织或小器官在营养基质上 进行无性繁殖的过程,它不受季节和地域限制,既能 达到快速繁育的目的,又能很好保持原种性优势,尤 其可对雌雄异株的沙棘作定性繁育,具有很大的发 展前景. l试验材料来源 辽宁建平山上采集. 2实验方法 2.1实验技术路线 预处理一外植体采摘一前期消毒一启动 分化一诱导增殖一诱导生根一+瓶外炼苗一一+ 移栽 2.2外植体的获得 春,秋季节剪取萌发的沙棘嫩枝条,剪去大叶 片,浸泡在加有数滴洗涤灵的适量溶液中(300~500 m1),并不停摇动8～15min,自来水冲洗30～60 作者简介:朱万芹(1969一),女,汉族,辽宁朝阳人,1992年辽宁 大学生物系毕业,主要从事生物技术,微生物发酵等研究. 收稿日期:2002—06一lO min,75酒精浸泡处理5～10s,再用3次氯酸钠 消毒液处理20～25min,无菌水洗涤4～5次,切取 幼芽上端0.8～1.5cm,无菌滤纸吸干并快速接种, 剪芽时间最好选于睛朗天气,且尽量选择带有嫩芽 的幼茎枝条.为了减轻外植体的污染率,取芽前7～ 8d隔天分3～4次向预剪枝条喷洒800900倍多 菌灵溶液,从而起到净化作用,降低污染率,减少损 失. 2.3培养基 本实验以MS为基础培养基,加蔗糖3,启动 分化培养基为1/2MS+4号细胞分裂素1.0mg/L +3号生长素0.2mg/L+琼脂代用品8g/I,芽增 殖培养基为MS+2号细胞分裂素0.5～2.5mg/L +3号生长素0.05～0.25mg/L十0.5活性碳+ 琼脂代用品8g/L.生根培养基为1/2MS+3号生 长素0.1～0.25mg/L+琼脂代用品6g/L.培养基 均以15磅20rain灭菌后使用. 2.4接种 将沙棘幼芽先接种于启动分化培养基上,待诱 导出芽后再转于诱导增殖培养基,最后转接于诱导 生根培养基上. 2.5培养条件 培养室温度:26℃+1℃ 相对湿度:60～70 光强度:2000～2500Lx 光照时间:10h/d 3结果与分析 3.1启动培养 外植体接种于启动培养基后,非染菌芽20d左 ●塞筮 40沙棘HIPPOPHAE第15卷 右可见有芽萌发,30～45d侧芽可长至3～5cm,接 种于启动培养基的沙棘芽成活率与芽的取材时间有 一 定关系.春季取材,且木质化程度较低的,培养中 褐死率也较低,实验从5月26日至9月28日分别 取4批次各100个芽接种,以观察芽的成活率和取 材的关系,接种前后进行同样的消毒处理,接种一周 后选出非染菌芽,观察其生长状况,并于45d时统 计结果.实验结果(表1)表明,在同样培养条件下,5 月份所采芽外植体褐死率平均为39.87,9月份所 采的外植体褐死率平均达58.79,由此看来,用于 组织培养的外植体取材时间应选春季为好. 表1外植体取材时间与褐死率关系 3.2诱导增殖培养 启动培养后,切成0.5～10cm长单芽或芽基愈 伤组织可用于增殖培养,芽基愈伤组织通常有较强 的分化能力.为探索合理的细胞分裂素与生长素的 浓度配比,设7种不同水平的实验方案,每种培养基 中接人20个单芽式芽基,随着侧芽萌发,芽基部长 出愈伤组织分化出芽,在适合的培养基上25d左右 芽长可达45cm,统计结果见表2,当2号细胞分裂 素浓度为2.0mg/L