分子生物学课件MB-10 expression regulation in eukaryote宣讲培训.pptVIP

第十章 真核生物基因表达的调控 Chapter 10 Expression regulation in Eukaryote; DNA染色体水平的调控 转录水平的调控 转录后水平的调控 翻译水平的调控;原核生物 ;基因组结构;核小体结构如图所示:;◆ 多级调控;一、DNA染色体水平的调控;异染色质结构致密，处于阻遏状态 常染色质结构疏松，是进行活跃转录的部位。 活性的染色质：结构疏松，利于转录因子和RNA聚合酶的滑动，使得基因表达。 非活性的染色质：DNA被压缩在细胞核中，基因处于非活性状态。组蛋白是染色质活性的阻遏蛋白。;活性染色质的主要特点;真核基因的活跃转录是在常染色质上进行的。转录发生之前，染色质常常会在特定的区域被解旋松弛，形成自由DNA。这种变化可能包括核小体结构的消除或改变，DNA本身局部结构的变化等，这些变化可导致结构基因暴露，促进转录因子与启动区DNA的结合，诱发基因转录。; 用DNA酶I处理各种组织的染色质时，发现处于活性状态的基因比非活性状态的DNA更容易被DNA酶I所降解。 鸡成红细胞（erythroblast）染色质中，β-血红蛋白基因比卵清蛋白基因更容易被DNA酶I切割降解。 鸡输卵管细胞的染色质中被DNA酶I优先降解的是卵清蛋白基因，而不是β-血红蛋白基因。;一般在转录起始点附近，即5′端启动子区域，少部分位于其它部位如转录单元的下游。;2、组蛋白的修饰（降低正电荷）;3、核基质与基因活性;4、DNA甲基化与转录抑制;真核生物细胞内存在两种甲基化酶：一种被称为维持性甲基化酶，另一种是构建性甲基化酶，前者主要在甲基化母链（模板链）指导下使处于半甲基化的DNA双链分子上与甲基胞嘧啶相对应的胞嘧啶甲基化。该酶催化特异性极强，对半甲基化的DNA有较高的亲和力，使新生的半甲基化DNA迅速甲基化，从而保证DNA复制及细胞分裂后甲基化模式不变。后者催化未甲基化的CpG成为mCpG，它不需要母链指导，但速度很慢。;甲基化的转录抑制作用机制： DNA甲基化直接干涉特异性转录因子与各自启动子内识别位点的结合。 甲基化CpG结合蛋白（MeCP）与模板DNA结合，阻止转录。 甲基化影响染色质的结构。稳定染色质的失活状态，阻止转录因子进入，防止染色质的活化;用同裂酶（isoschizomers）可检测CCGG上C的甲基化状态。MspI可切割CmCGG或CCGG，HapII可切割未甲基化CCGG; 在一些不表达的基因中，启动区的甲基化程度很高，而处于活化状态的基因则甲基化程度较低。;;◆DNA甲基化的生物学效应;◆ 基因组印记(genomic imprinting);1956年　A.Prader 和H.Willi 父源染色体15q11-13区段缺失, 智力低下、过度肥胖、身材矮小、小手足 ;　　PWS和AS这一对综合征表明父亲和母亲的基因组在个体发育中有着不同的影响，这种现象被称为基因组印迹(genomic imprinting)。 ;近年研究表明，基因组印迹是两个亲本等位基因的差异性甲基化型造成了一个亲本等位基因的沉默，另一个亲本等位基因保持单等位基因活性;;? 雌性胎生哺乳类动物细胞中两条X染色体之一在发育早期随机失活，以确保其与只有一条X染色体的雄性个体内X染色体基因的剂量相同。一旦发生X染色体失活，使该细胞有丝分裂所产生的后代都保持同一条X染色体失活。; 抑癌基因甲基化 不表达;如：非洲爪蟾的染色体上有约450拷贝编码18SrRNA和28SrRNA的DNA，在卵母细胞中它们的拷贝数扩大了1000倍.一旦卵母细胞成熟，多余的rDNA就没有用了，将被逐渐降解。受精之后，染色体DNA开始复制，并通过有丝分裂的方式，不断扩大细胞群体。在此期间，多余的rDNA继续被降解，直到分裂产生几百个细胞时，rDNA的过剩现象就不复存在了。;6、基因重排（rearrangement）;免疫球蛋白的肽链主要由可变区（V区）、恒定区（C区）以及两者之间的连接区（J区）组成;V、C和J基因片段在胚胎细胞中相隔较远。编码产生免疫球蛋白的细胞发育分化时，通过染色体内DNA重组把3个相隔较远的基因片段连接在一起，从而产生了具有表达活性的免疫球蛋白基因。;二、真核生物转录水平的调节;反式作用元件（trans-acting element）：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。;1、顺式作用元件（cis-acting element）;（2）增强子（enhancer）;;⑤ 没有基因专一性，可在不同基因组合上表现增强效应;⑧ 增强子要有启动子才能发挥作用，没有启动子存在，增强子不能表现活性。但增强子对启动子没有严格的专一性，同一增强子可以影响不同类型启动子的转