扬州大学 《动物细胞工程》课件 第七篇 章　成体干细胞.pptVIP

体外培养建系 早期胚胎的神经管和神经嵴或胎儿的脑组织是体外培养神经干细胞的最理想材料来源。 首要问题是维持其分裂、增殖的能力。 基本培养基是一种特定的N2液。添加因子有葡萄糖、人胰岛素、人转铁蛋白、黄体酮、二氢氯丁二胺、硒酸钠、谷氨酰胺和肝素等。 细胞传代时，用手术刀片沿着神经球中间的纵横轴切割成四等份，则神经干细胞可维持稳定而快速的生长。 生物学特性 未分化的神经干细胞一般每隔7－10天细胞数可增加一倍，一般可传35代，历时一年，在这期间，细胞系可分化为神经元、少突神经胶质细胞和星形细胞等多能性。 第七章　成体干细胞 本章内容提要 概　述 成体干细胞分化的可塑性 成体干细胞的体外培养和特性 成体干细胞研究中的问题 成体干细胞在再生医学中的应用 概　述 一 定义 成体干细胞是指一群分布在成体组织中尚未分化的、具有自我更新、并负有构建和补充某种组织的各种类型细胞潜能的干细胞。 传统观点 干细胞一旦分化成熟，就不再分裂增殖了； 成体干细胞的发育潜能是限能或少能的； 成体干细胞只能分化为特定组织器官若干类型细胞。 转折点 1997年初，英国科学家Wilmut等用体外培养、高度分化的母羊乳腺细胞核移植入去核卵细胞，克隆出了 “Dolly”。 表明某些高度分化的体细胞核仍具有一套完整的遗传信息，能指导胚胎发育成为一个完整的新个体。 在特定的条件下，分化的体细胞仍具发育的全能性。 三 特征 多能性 广泛性 迁移性 可调控性 增生活跃组织（如黏膜、骨髓） 不活跃组组织（如神经脂肪、肺部）。 体内发生转分化的中介环节。 Blau等将干细胞借助于循环穿梭于组织的特性成为“干细胞高速公路”。 高度依赖于干细胞所处的三维空间结构和多维的分化信号。 微环境中的细胞因子、同种或异种细胞之间的接触、细胞外基质成分等对成体细胞的分化方向与进程起到重要的调控作用。 成体干细胞分化的可塑性 目前对于可塑性的机制有几种假说: 假说1 成熟的组织内的确存在由胚胎时残留下来的多能干细胞。 Verfaillie等证实在成体许多组织中余存着一种稀有数量的胚胎样原始干细胞，表达胚胎干细胞的遗传标志，体外的培养条件也基本类似于胚胎干细胞。 假说2 可塑性是细胞融合的结果。 20世纪初期，通过细胞融合产生杂合体而改变细胞命运，例如将肌母细胞与纤维母细胞融合后，可在纤维母细胞内观察到肌蛋白表达； 将鼠骨髓细胞或神经细胞与胚胎干细胞共同培养后，骨髓细胞和神经细胞会产生明显的逆向分化，获得胚胎干细胞特征； 最近有研究人员将热休克的小气道上皮细胞与骨髓间质干细胞共同培养，观察到间质干细胞与损伤的气道细胞融合新生出气道上皮，而且融合率大于1%，推测在体内出现急性器官衰竭和组织坏死时有可能通过细胞融合完成组织修复； 假说3 细胞由成熟状态去分化为较原始状态，随后再分化为成熟的其他类型细胞，“克隆羊多利”明确显示细胞的遗传信息可以被再程序化，体细胞可以去分化成为多能干细胞； 低等脊椎动物的研究，显示损伤部位可以出现与胚胎发育类似的未分化细胞进行修复，嵘螺的研究表明其通过局部已分化终末细胞去分化完成修复功能； 1、骨髓干细胞 2、神经干细胞 4、骨骼肌干细胞 3、肝干细胞 1、骨髓干细胞 由不同类型多种细胞成分组成的组织，除了分化的血细胞和间质细胞外，还存在两类成体干细胞： 一类是造血干细胞（hematopoietic stem cell,HSC）,能生成各种血细胞； 另一类是间质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC），能生成内皮细胞、脂肪细胞和成纤维细胞等。 体外培养的骨髓细胞，HSC细胞呈悬浮集落生长，而MSC细胞则贴壁生长，通过换液很容易把两者分开。 间质干细胞 证明可分化为包括骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和肌肉细胞等，也能分化成内皮细胞和内胚层的肝细胞。 当MSC细胞移植入小剂量射线照射的宿主，则造血系统和胃肠道组织有所增多，表明MSC细胞在异常环境中，细胞分化的可塑性增加。 造血干细胞 HSC移植至不同的体内微环境，可分化为3个胚层的各种类型细胞，包括心肌、骨骼肌、血管内皮系统、肝细胞、肺泡、食道、肠道、胃、胆管以及皮肤和神经细胞等。 HSC细胞在体外培养时，发现血细胞系之间，即淋巴细胞系与髓性细胞系之间和系内也存在分化方向的转变。 2、神经干细胞 神经系统中一类能自我更新，并产生神经元和神经胶质细胞的前体细胞。 主要存在于中枢神经系统的两个神经发生区域：脑的海马区和次脑室区，以及包括脊髓等其他非神经性的区域。 通过个体发育不同阶段的神经干细胞移植至宿主不同部位，发现神经干细胞移植分化为神经细胞的潜能具有发育阶段的依赖性，说明成体中的神经干细胞分化潜能受