ALK病理学和诊断指南.pptVIP

* * * * * * * * * * ALK的病理学和诊断指南 返回目录 本文由医学百事通志愿者提供 医学百事通免费健康咨询： FISH –ALK 检测的现行标准 阳性结果 标准：分开的红/绿信号 非典型：单个红点 非典型：分开 + 单个红点 ALK 阳性的定义: ≥15% 的细胞呈阳性 Varella-Garcia et al., ASCO 2010; Abs #10533 FISH –ALK检测的现行标准 阴性结果1 标准：融合信号 非典型：单个绿点 1. Varella-Garcia et al., ASCO 2010; Abs #10533 FISH检测样本的制备及染色概述 肿瘤区域的确定 对一玻片进行HE染色 标出肿瘤区域（不包括坏死区域、原位癌和小细胞癌） 用标记好的HE染色玻片作为模板，在未染色玻片上标注肿瘤区域* (后续步骤参见未染色玻片) FFPE样本的制备 从组织块上切下≥ 2段，厚度5±1μm 置于表面带正电荷的载玻片上 去石蜡?预处理?蛋白酶处理 与探针杂交 清洗 (杂交当日) DAPI复染 准备好玻片自以下步骤开始 *FISH法中应使用来自HE染色的连续10片内的切片 Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit Package Insert ALK FISH信号解读指南 典型的信号形式 阴性信号：邻近或融合的橙色和绿色 阳性信号：分开或绿色丢失 Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit Package Insert EML4-ALK的FISH检测中需注意的问题 至少计数50个肿瘤细胞以确保结果的精确性 1 如果红色和绿色探针分离 2个信号直径 ，则认为FISH信号为阳性1 ALK 重排可能遍及整个肿瘤而非局部2 约5%-11%的细胞会出现假阳性分离1,2 ALK重排细胞比例的增加与克唑替尼治疗的肿瘤缓解程度并无关联3 Varella Garcia et al., IASLC 2011; Abs #MTE36.1 2. Camidge et al., Clin Cancer Res 2010; 16:5581-5590 3. Camidge, IASLC 2011; Abs #MO04.04 FISH病理报告实例：显示 EML4-ALK 融合 Courtesy I. Wistuba FISH病理报告实例：显示无EML4-ALK 融合 病理报告要使用准确的语言，如 “EML4-ALK 重排 15%” “ALK 异常” 还包括其他变异，如ALK基因拷贝数增加，此变异未被确认为对ALK抑制剂应答的预测性标记物1 Courtesy I. Wistuba 1. Raftopoulos et al., IASLC 2011, Abs #O05.06 免疫组织化学(IHC) 检测ALK表达 使用高敏感度检测系统后，越来越多的数据支持IHC可用作初步筛查的方法 敏感度和特异度可达100%，尽管在不同研究中存在差异 与FISH相比，IHC是一种更常规的技术，成本低、工作量相对小 ALK IHC FISH 患者 1: IHC显示ALK表达量高， FISH显示重排 患者2: IHC显示无ALK表达， FISH显示无重排 Mino-Kenudson Clin Cancer Res 2010; 16:1561-1571. IHC需要标准化 从临床试验过渡到大规模使用IHC 前，还需要对以下方面进行规范： 最好的抗体和检测系统是什么 应采用哪种评分系统 有哪些生物学相关的截止点 采用适当的质量控制 抗体 研究数量 供货商 敏感度范围 特异度范围 ALK1 8 Dako 9%-100% 97%-100% 5A4 6 Abcam, Novocastra 18%-100% 96%-100% D5F3 1 Cell Signaling 100% 99% Adapted from Yi et al., J Thorac Oncol 2011; 6:459-465 and Mitsudomi et al., ASCO 2011, Abs #7534 * * * * * * * * * *