T3 核受体各亚型mRNA在糖尿病患者外周血白细胞中的表达.docVIP

　　T3 核受体各亚型mRNA在糖尿病患者外周血白细胞中的表达 作者：李晓苗　胡元会　李源　谢永红 【关键词】甲状腺激素 关键词:受体，甲状腺激素;糖尿病;白细胞 摘要:目的了解T3核受体介导的T3反应在糖尿病患者外周血白细胞中的表达.方法应用半定量RT-PCR法，将30例糖尿病患者分为无并发症组（A组）、急性并发症组（B组）及慢性并发症组（C组），观察各组T3核受体（T3R）各亚型mRNA变化.结果糖尿病患者外周血白细胞中T3Rα1，T3Rα2mRNA表达增强（Plt;0.05），T3Rβ1，T3Rβ2mRNA变化不大.B，C两组这种变化显著（Plt;0.05）.结论在外周血白细胞中，T3RmRNA各亚型表达与糖尿病患者低T3综合征密切相关. 　　Keywords:receptors，thyroidhormone;diabetesmellitus;leukocytes 　　Abstract:AIMToobservetherelationshipbetweentheT3RmRNAexpressionindiabetesmellitus（DM）.METH┐ODSByusingsemi-quantitativeRT-PCRmethod，weex-aminedT3RmRNAlevelsinperipheralleukocytesofDM（A，B，C）.RESULTST3Rα1，T 3Rα2mRNAlevelsallin-creasedinDM，especiallyinBandC（Plt;0.05）.CONCLU┐SIONInperipheralleukocytes，theexpressionlevelsofT3RmRNAarerelatedtoDM，exceptT3RβmRNAlevel.　 　　0引言 　　甲状腺激素作用于人体组织、器官，对人体生长发育、代谢起着重要的调节作用.三碘甲状腺原氨酸（T3）和其受体（T3R）形成复合物，介导靶基因的启动因子，从而促进结构基因表达，调节相关蛋白的合成，维持机体代谢平衡.研究发现糖尿病患者存在低T3综合征，且伴随有并发症而加重［1，2］.我们对糖尿病患者低T3综合征时外周血白细胞中T3RmRNA的表达进行了半定量分析，旨在了解低T3综合征状态下T3RmRNA各亚型变化及变化趋势. 　　1对象和方法 　　1.1对象按1999年WHO诊断标准确诊的糖尿病患者30（男17，女13）例;平均年龄45（17～67）岁;病程6mo～21a，其中型糖尿病6例，型糖尿病24例.根据是否并发急、慢性并发症将患者分为3组.A组（无并发症组）10（男7，女3）例，平均年龄46（29～67）岁，病程2mo～6a，其中型1例，型9例.B组（急性并发症组）10（男6，女4）例，其中糖尿病酮症酸中毒5例，肺部感染4例，高渗性非酮症昏迷1例，平均年龄40（17～60）岁，病程6mo～5a，型糖尿病5例，型糖尿病5例.C组（慢性并发症组）10（男4，女6）例，并发有糖尿病肾病和/或糖尿病视网膜病变，平均年龄57（41～67）岁，病程4～15a，均为型糖尿病.D组（正常对照组）15（男7，女8）例，平均年龄45（18～60）岁. 　　1.2方法外周血白细胞RNA的提取采用异硫酸肽-酚-氯仿一步法［3］，随后取RNA加入随机引物，70水浴5min，0水浴5min，后加入AMV（禽源反转录酶）逆转录酶，5×AWV缓冲液，10mol#12539;L-1dNTP，0.67kat#12539;L-1RNA酶抑制剂，加DEPC处理水至总体积20μL，37恒温1h，95灭活5min后的cDNA存于-20冰箱，以逆转录产物cDNA为模板，以GAPDH为内参照，在DNA自动扩增仪上进行PCR.T3Rα的扩增条件为94变性30s，59复性45s，72延伸45s.T3Rβ的扩增条件为94变性30s，55复性45s，72延伸45s.28个循环后，取反应产物8μL，以GADDH为对照，20g#12539;L-1琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶图像分析系统（GDS8000）进行灰度分析. 　　统计学处理:扩增后产物灰度值与内参照灰度值进行比较，所得数值以x±s表示，组间采用方差分析法. 　　2结果 　　2.1糖尿病（A+B+C）组与正常对照（D）组总T3RmRNA变化40例糖尿病患者外周血中白细胞T3mRNA明显高于正常对照组（Tab1）. 　　表1糖尿病组和正常对照组T3RmRNA比较　略　 　　2.2各组糖尿病外周血白细胞中T3R各亚型mRNA表达水平各组糖尿病患者T3Rα1，T3Rα2mRNA较对照组都明显增加，且随并发症而逐渐增强，T3Rβ1，T3Rβ2mRNA虽然与对照组无明显差异，但是有一定的增长趋势（Tab2）. 　　表2A，