八双向凝胶电泳.pptxVIP

概述 原理IEF，SDS 双向凝胶电泳分离操作 双向凝胶电泳检测 双向电泳分离技术的优缺点 DI GE技术;一、双向凝胶电泳概述 双向电泳的思路最早由Smithies和Poulikc提出，蛋白质第 一向电泳是根据其自由溶液迁移率(free-solutionmobility)， 在滤纸条上进行；第二向电泳方向与第一向垂直，在淀粉胶 上进行。 随着聚丙烯酰胺凝胶的发明，双向电泳支持介质逐渐转向 聚丙烯酰胺凝胶，即双向凝胶电泳。1969年，双向凝胶电泳 在原理上有了新的发展，以第一向为蛋白质等电聚焦的双向 凝胶电泳建立起来(即IEF)。 20世纪70年代初，第二向电泳中使用了十二烷基硫酸钠 (SDS)，使第二向电泳基本上根据蛋白质的相对分子质量来 分离，从而奠定了现代双向凝胶电泳的基础(即IEF-SDS PAGE)。1975年，O‘FarrellL、Kloset和Scheele分别对双向 凝胶电泳做进一步的优化，建立了高分辨的双向凝胶电泳。;双向电泳分析中的样品制备;可溶性样品 ;样品的溶解;增加样品溶解性的手段;起载体作用的两性电解质：即便在变性剂和表面活性剂存在的情况下，某些蛋白质也需要在盐离子的作用下才能保持其处于溶解状态，否则这些蛋白质在其处于PI点时会发生沉淀。 Carrier ampholytes的作用在于捕获样品中的少量盐分，从而保证蛋白质的溶解性