蛋白质基本机构和功能.pptx

主 要 内 容;蛋白质(Protein)的种类繁多; 蛋白质是生命的物质基础;第一节 蛋白质的分子组成;C 50~55% H 6~7% O 19~24% N 13~19% S 0~4% 有些蛋白质还含有P、Fe、Cu、Mn、Zn、Se等。 各种蛋白质含氮量接近，平均为16%；样品测定中1克氮相当于含6.25克蛋白质（凯氏定氮法） 。;二、蛋白质的基本组成单位——氨基酸; （一）氨基酸的分类; 1.非极性疏水氨基酸 侧链为烃基、吲哚环、甲硫基等疏水性基团。这类氨基酸在水中的溶解度小于极性中性氨基酸。; 3.酸性氨基酸 侧链上有羧基，在水溶液中能释放出H+而带负电荷的氨基酸。有谷氨酸、天冬氨酸。;;Leu;(二)氨基酸的理化性质;氨基酸的等电点（isoelectric point,pI); 3.紫外吸收性质 色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸对紫外光有吸 收作用。其最大吸收峰在280nm附近，以色氨酸吸收最强。 利用此性质可采用紫外分分光度法测定溶液中蛋白质的含量。;4.氨基酸的化学反应 （1）茚三酮反应  氨基酸与水合茚三酮在溶液中共热，发生一系列反应，生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm。此反应可用于氨基酸的定性和定量分析。 注：脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应产生 黄色化合物。 ;氨基酸分析仪图解;（2）与亚硝酸反应:Van Slyke 法测定氨基酸 氨基酸的氨基在室温下与亚硝酸作用，生成氮气。通过在标准条件下测定生成的氮气体积，即可计算出氨基酸的量。 生成的氮气只有一半来自氨基酸。 可用于氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。;（3）桑格（Sanger) 反应? 氨基酸的－NH2与2，4一二硝基氟苯（DNFB）反应，生成DNP-氨基酸；黄色，提取、层析法鉴定来测定氨基酸。;（4）丹磺酰氯（DNS-Cl）反应 氨基酸的－NH2与DNS反应；由于丹磺酰氯基具有强烈的荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，并且水解后的DNS－氨基酸不需要提取，可直接用纸电泳或薄层层析加以鉴定。;(5)埃德曼反应(Edman reaction） 苯异硫氰酸酯，PITC 苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸），无色，可以用层析法分离鉴定。 被Edman用来鉴定多肽的NH2末端氨基酸;三、氨基酸在蛋白质分子中的连接方式;;;??二节 蛋白质的分子结构;蛋白质是由许多氨基酸单位通过肽键连接形成的具有特定分子结构的高分子化合物。 蛋白质的分子结构可分为一级、二级、三级和四级。一级结构是蛋白质的基本结构，二级、三级、四级结构称为高级或空间构象。;一、蛋白质的一级结构; 二、蛋白质的空间结构;（一）蛋白质的二级结构 ; 2.蛋白质二级结构的主要形式;;α-螺旋的结构特点 ①多肽链以肽键平面为单位，α-碳原子为 转折点，有规律的盘绕成右手螺旋结构。 ②每3.6个氨基酸残基盘绕一圈，螺距为0.54 nm。 ③相邻螺旋的肽键之间形成氢键，方向与长 轴基本平行，维持螺旋的稳定。 ④R基团伸向螺旋外侧，其大小、形状及电荷性质均影响α-螺旋的形成。;（2）β-折叠; β-折叠的结构特点 ①多肽链呈伸展状态，肽键平面沿长轴折叠呈 锯齿状，两平面间夹角为110°，R基交替地伸向锯 齿状结构的上下方。 ②若干肽段互相靠拢，平行排列，通过氢键连 接。氢键的方向与长轴垂直。 ③若两条肽段走向一致（N端、C端方向相同） ，称为顺向平行；反之，称之为逆向平行，逆向更 稳定。 ;β-折叠包括平行式和反平行式两种类型;（3）β-转角; β-转角的特点 ①主链骨架本身以大约180°回折 ②回折部分通常由4个氨基酸残基构成 ③构象依靠第一残基的-CO基与第四残基的- NH 基之间形成氢键来维系。  ; （4）无规卷曲;（二）蛋白质的三级结构;结构域（domain） 分子量大的蛋白质在形成三级结构时，肽链中某些局部的二级结构汇集在一起，形成发挥生物学功能的特定区域，称为结构域。 ;由一条多肽链形成的蛋白质，其最高级结构为三级结构。只有具有三级结构的蛋白质才具有生物学活性。; （三）蛋白质的四级结构 许多蛋白质分子是由两条或两条以上具有独立三级结构的多肽链通过非共价键聚合而成，其中每条具有独立三级结构的多肽链称为亚基。 概念