p p dde β bhc及其联合对大鼠睾丸支持细胞vimentin n cadherin和fshr表达的影响-effects of p p dde β bhc and its combination on vimentin cadherin and fshr expression in rat testicular sertoli cells.docxVIP
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p p dde β bhc及其联合对大鼠睾丸支持细胞vimentin n cadherin和fshr表达的影响-effects of p p dde β bhc and its combination on vimentin cadherin and fshr expression in rat testicular sertoli cells
有重要意义。本文以p,p’-DDE和?-BHC作为受试物,进行两者单独及联合染毒,探讨p,p’-DDE、?-BHC单独及联合作用对大鼠睾丸支持细胞Vimentin、N-cadherin和FSHR的影响,为揭示有机氯农药对雄性生殖系统作用的可能分子机制提供理论依据。第一部分p,p’-DDE、β-BHC及其联合对支持细胞活力的影响目的:探讨p,p’-DDE、β-BHC单独及联合染毒对支持细胞活力的影响,确定培养细胞的染毒剂量。方法:对离体培养两天的支持细胞分别用10、30、50、70?mol/L的p,p’-DDE、?-BHC单独及联合染毒24h,MTT比色法测定其在波长490nm处的吸光度值,计算细胞存活率。结果:p,p’-DDE、β-BHC单独及其联合染毒作用于支持细胞24h后,随着染毒浓度的增加支持细胞的吸光度值逐渐降低。与溶剂对照组相比,p,p’-DDE和β-BHC在50?mol/L和70?mol/L单独染毒组吸光度明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。50?mol/L联合组吸光度显著降低,与溶剂对照组和等浓度p,p’-DDE和β-BHC单独染毒组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:p,p’-DDE和β-BHC染毒浓度达50?mol/L时,开始影响支持细胞的活力;p,p’-DDE和β-BHC二者联合染毒对支持细胞活性的影响强于单独染毒。第二部分p,p’-DDE、β-BHC及其联合对离体培养支持细胞Vimentin、N-cadherin和FSHR表达的影响目的:探讨p,p’-DDE、β-BHC及其联合作用对支持细胞Vimentin、N-cadherin和FSHRmRNA和蛋白表达的影响。方法:分别采用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和Westernblotting方法测定离体培养支持细胞Vimentin、N-cadherin和FSHRmRNA和蛋白表达情况。结果:支持细胞内VimentinmRNA表达水平在10μmol/Lβ-BHC剂量组明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05),其他剂量组均无明显差异。随着各组染毒剂量的增加,Vimentin蛋白表达呈逐渐降低的趋势,其中各β-BHC组、50μmol/L联合组与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。随着各组染毒剂量的增加,支持细胞内N-cadherinmRNA表达水平呈先升高后降低趋势,其中30μmol/Lp,p’-DDE、30μmol/Lβ-BHC单独组和10μmol/L联合组表达显著升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。而N-cadherin蛋白表达水平在30、50μmol/Lp,p’-DDE组、50μmol/Lβ-BHC组及各联合组均显著降低,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。随着各组染毒剂量的增大,FSHRmRNA表达水平呈先升高后降低趋势,其中10μmol/Lp,p’-DDE和10μmol/Lβ-BHC单独组表达明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。50?mol/L各组表达均降低,其中β-BHC及联合组与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。10、50?mol/Lp,p’-DDE组、各剂量?-BHC组及50?mol/L二者联合组FSHR的蛋白表达水平均降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);10?mol/L联合组与等浓度p,p’-DDE和β-BHC单独组相比,单独组FSHRmRNA表达水平降低明显,差异具有统计学意义(P0.05);30?mol/L联合组与等浓度β-BHC组比,β-BHC组FSHRmRNA表达水平降低明显,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:p,p’-DDE、?-BHC单独及联合作用于离体培养的支持细胞24h后,较低剂量?-BHC可刺激VimentinmRNA表达升高,高剂量的p,p’-DDE、?-BHC单独及二者联合作用均可下调支持细胞Vimentin蛋白的表达。较低剂量的p,p’-DDE、β-BHC及其联合作用可刺激N-cadherinmRNA表达升高;p,p’-DDE、?-BHC单独及二者联合作用可抑制N-cadherin蛋白的表达。较低剂量的p,p’-DDE、?-BHC单独及二者联合作用可刺激支持细胞FSHRmRNA表达升高,而高剂量可抑制FSHRmRNA表达;p,p’-DDE和?-BHC可下调支持细胞FSHR蛋白的表达,二者联合作用比单独组弱。第三部分p,p’-DDE、β-BHC及其联合对青春期SD大鼠睾丸Vimentin、N-cadherin和FSHR表达的影响目的:探讨p,p’-DDE、β-BHC及其联合作用对青春期SD大鼠睾丸内Vimentin、N-cadherin和FSHRmRNA和蛋白表达的影响。方法:分
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