pdgfbb诱导下不同细胞外基质成分对气道平滑肌细胞生物力学特性的影响-effects of different extracellular matrix components on biomechanical properties of airway smooth muscle cells induced by pdgf bb.docxVIP

摘要长期重度哮喘气道中，存在着气道结构的改变即气道重构的现象。平滑肌增 生肥厚和气道壁细胞外基质的异常沉积等是气道重构中的主要结构改变。气道平 滑肌与周围环境中细胞外基质（Extraellular matrix, ECM）之间的相互作用影响以 及与其它因素如炎症因子、生长因子的复杂交错作用很可能进一步参与了哮喘中 的气道重构及气道高反应。许多体外研究实验发现 ECM 成分不仅能调节体外培养 的气道平滑肌细胞（Airway smooth muscle cells, ASMCs）的合成、增生、迁移， 而且也能通过生物、化学信号途径影响平滑肌的表性和功能。并且来自于哮喘患 者的气道平滑肌细胞表达细胞外基质成分也与正常健康者不同。但 ECM 异常沉积 如何参与调节气道平滑肌的功能以及他们与气道高反应、气道重构的确定关系至 今还不清楚。本文主要是研究层粘蛋白（Laminin, LN）、纤维连接蛋白（Fibronectin, FN）、I 型胶原（Collagen I, Col I）三种不同 ECM 蛋白对血小板生长因子（Platelet derived growth factor-BB, PDGF-BB）诱导的大鼠 ASMCs 生物力学特性变化的影响。这为明确哮喘中气道组织重构、炎症反应与气道高反应之间的相互作用，提供了指导 和借鉴意义。本文具体的研究内容分为如下几个部分：1. 大鼠 ASMCs 的原代培养及鉴定：本实验中采用了组织块贴壁法培养了原 代的 ASMCs。相差显微观察第三代的 ASMCs 表现“波峰－波谷”的生长特征。 用免疫组织化学的方法对 ASMCs 的 sm-α-actin 进行染色鉴定，发现所培养的 ASMCs 阳性表达 α-actin 在 95%以上，证明所培养的 ASMCs 纯度较高。2. PDGF-BB 诱导下不同细胞外基质成分对 ASMCs 形态的影响：采用显微图 像方法观测细胞形态和宽长比。结果发现：相比较不含 PDGF-BB 的无血清培养基， 在有 PDGF-BB 的培养条件下，ASMCs 形态总体上变细变长，细胞长轴明显延长， 即细胞宽长比减小，但附着在 LN 上的 ASMCs 比附着在 Col I 或 FN 上的细胞宽长 比相对要大（P0.01）。3. PDGF-BB 诱导下不同细胞外基质成分对 ASMCs 力学特性的影响：采用光 学磁微粒扭转细胞测量方法（OMTC）测量细胞受 KCl 或组胺（Histamine）刺激 时的收缩反应。结果发现：ASMCs 对 KCl 刺激的收缩响应随培养时间增加而增加（P0.01），但不受 ECM 蛋白成分的影响。而在有 PDGF-BB 的培养条件下，ASMCs对 KCl 或 Histamine 刺激的收缩响应总体上随培养时间呈下降趋势（P0.05 或P0.01），但附着在 LN 上的 ASMCs 收缩响应下降程度相对较小。 本文研究表明：ASMCs 受 PDGF-BB 作用时，其形态和收缩性的变化与不同ECM 蛋白成分有关。研究发现 ECM 蛋白成分对 PDGF-BB 诱导的 ASMCs 形态和 收缩性变化的差异性影响，对于深入认识基质蛋白、炎症因子与气道平滑肌细胞 的相互作用及其与哮喘病理生理机制的关系具有重要意义。关键词：气道平滑肌细胞，细胞外基质，蛋白，血小板生长因子，细胞形态，收 缩力ABSTRACTIn chronic server asthma, the airway structure changed, called airway remodeling. The increasing of airway smooth muscle (ASM) and alteration in the amount and composition of ECM is the main structural changes in airway remodeling. The interaction between the ASMCs and ECM and with other factors such as inflammation factors, growth factors man further involve in airway hyperresponsiveness. Study in intro proved that ECM can modulate the proliferation, migration, also can affect the phenotype and function of ASMCs. Moreover, the production of ECM by ASMCs from asthma is different fr