rhodococcus sp.p14降解多环芳烃过程中双加氧酶baa和细胞色素p450单加氧酶cyp108j1功能的研究-study on the functions of dioxygenase baa and cytochrome p450 monooxygenase cyp 108 j 1 during the degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by rhodocus sp.docx

汕头大学硕士学位论文汕头大学硕士学位论文万方数据万方数据摘要多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs）是一种能在环境中持久 性存在的难降解污染物，具有很强的致突变性、致畸性和致癌性。通过微生物 降解环境中的 PAHs 是目前公认的最有效的治理方法。研究发现在微生物降解 PAHs 过程中，环羟化加氧酶催化的环羟化加氧反应是大多数微生物降解过程的 第一步反应，是降解过程的关键步骤。所以，环羟化加氧酶成为国内外科学研 究者们研究的热点。在前期研究中，课题组从海洋沉积物环境中分离到的一株 海洋红球菌 Rhodococcus sp. P14(CGMCC NO.2343)。该菌能降解高分子量的 PAHs，菌株全基因组序列分析发现在 Rhodococcus sp. P14 基因组中存在多个可 能与 PAHs 降解有关的环羟化双加氧酶(RHD)和细胞色素 P450 单加氧酶(CYP)。 本文通过代谢组学分析、基因组信息分析、转录表达分析及外源表达分析，研 究红球菌 Rhodococcus sp. P14 降解 PAHs 过程中环羟化加氧酶的作用，取得如 下主要结果：（1）利用 GC-MS 检测到 Rhodococcus sp. P14 在降解苯并芘、苯并蒽、芘、 蒽、联苯过程中的中间代谢产物 9,10-蒽醌、苯并蒽-7,12-二酮、1-羟基芘、9，10-蒽醌、4-羟基联苯。（2）通过基因组信息分析，在 Rhodococcus sp. P14 中筛选到可能参与 PAHs 环羟化的环羟化双加氧酶 Baa 和细胞色素 P450 单加氧酶 CYP108J1。Baa 大亚基 BaaA 具有两个高度保守的结构域 Rieske [2Fe-2S] 中心(CXHX17CX2H) 和非血红素单核铁绑定区(DX2HX4(X5)H)； CYP108J1 具有 CYP 蛋白的保守结 构域亚铁血红素结合域(heme)FX2GX3CXG。在系统进化上，BaaA 与能催化低 分子芳香化合物环羟化的 BenA 的相似性为 64.8%；CYP108JI 与来自 CYP108 家族的能催化 PAHs 的 CYP108D1 相似性为 47.9%。（3）通过 RT-qPCR 分析显示 Baa 大亚基基因 baaA 在苯并蒽、菲、蒽、荧 蒽、联苯，萘诱导下分别上调表达了 5.6、3.3、12.8、 4.6、7.7 和 9.9 倍；而在 芘诱导下表达量下调了 52.5%。基因 cyp108j1 在苯并蒽、芘、菲、蒽、荧蒽、 联苯和萘诱导下分别上调了 2.4、8.1、16.0、11.3、3.6、8.2 和 9.3 倍 。I（4）通过外源表达分析发现 Baa 对苯并蒽、蒽分别有 56.3%和 40.6%转化效率，其催化反应产物分别为苯并蒽-7,12-二酮和 9,10-蒽醌。CYP108J1 对苯并 蒽、菲、蒽和联苯转化效率分别为 48%、62%、52%和 39.8%，其催化反应产物 分别为苯并蒽-7,12-二酮、1-羟基菲、9,10-蒽醌和邻羟基联苯。关键词：红球菌 P14; 多环芳烃; 环羟化双加氧酶; 细胞色素 P450IIAbstractPolycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are one class of persistent organic pollutants in the environment, which show strong mutagenicity, carcinogenicity and teratogenicity. Microbial degradation is the most important way of removing the PAHs currently. Microbial biodegradation of PAHs have been extensively studied, in which hydroxylation of the aromatic-ring mostly by ring hydroxyl oxygenases is one of the most common initial degradation step. The research of ring hydroxyl oxygenases(dioxygenases or cytochrome P450 monooxygenases) is the hotspot of scientific research in the world currently. In the former studies, HYPERLINK /%5b%E5%8C%BB%5d%20Rhodococcu