油菜花粉多糖分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究.pdfVIP

摘要 摘要 近年来，花粉作为优良的全营养食物被全世界广泛关注，掀起一股“花粉研 究热”。多年来我国花粉的基础研究和应用研究己全面深入地开展，并取得多方 面的可喜成果，有些方面己进入国际研究的前沿。 油菜花粉是中国产量最大的花粉，充分利用我国油菜花粉资源，对油菜花 粉进行深入系统研究，使这一丰富资源的开发和利用提高到一个新的水平，将 会产生极大的经济和社会效益。油菜花粉多糖具有抗肿瘤、增强免疫等功能， 然而目前报道的油菜花粉多糖的最高提取率仅达1．450％，为了更好地提高油菜 花粉多糖的提取率，本论文采用温差一机械法、温差一超声波法和超微粉碎法 三种方法对油菜花粉进行破壁，以期找到最佳的破壁方法。并在系统研究了油 菜花粉多糖的提取、分离纯化、理化性质以及初级结构的基础上，对其抗氧化 的活性功能进行了评价，为今后油菜花粉多糖的研究与开发奠定了基础。本论 文主要研究内容与结论如下： 1．测定了油菜花粉中蛋白质、脂肪、黄酮、以及几种金属元素如Cu、Mg、Fe、 Ca、Zn的含量，为油菜花粉的开发利用提供了科学依据。测定结果显示油菜 花粉中蛋白和脂肪含量较高，所测的几种金属元素也较丰富。 2．采用温差一机械法、温差一超声波法和超微粉碎法分别对油菜花粉进行破 壁，发现温差一机械法和温差一超声波法破壁效果远不如超微粉碎破壁，超 微粉碎破壁率可高达99％以上。 3．以葡萄糖为对照，优选苯酚一硫酸法测定油菜花粉多糖含量的显色条件。最 佳的显色条件为：取待测油菜花粉多糖2mL，加入浓度为5％苯酚1mL，迅 速滴加浓硫酸5．0mL，摇匀后于室温放置20min，在482Bill处测定吸光度。 4．对油菜花粉多糖的水提工艺进行了研究，探讨提取温度、提取时间、料液比 和提取次数对多糖提取率的影响。在单因素试验的基础上，通过正交试验确 定最佳提取工艺条件。结果表明提取温度对多糖提取率的影响最大，其次为 提取时间、次数，料液比的影响最小。油菜花粉多糖提取的最优条件为：提 取温度为70。C，提取时间为4 h，提取次数2次，料液比为l：8，此时多糖提 取率达4．48％。 IJ 摘要 5．比较Sevag法和TCA法对油菜花粉多糖脱蛋白的效果。实验结果表明TCA 法对油菜花粉多糖中蛋白的脱除率远高于Sevag法，并且多糖的损失率也低 于Sevag法。 6．用DEAE--纤维素对油菜花粉精制多糖进行初步分离，主要得到中性多糖DI s一200柱层析分别对多糖Dl和D3 和酸性多糖D3两个组分。再用Sephacryl S--300柱层 进一步分离纯化得到中性多糖Dll和酸性多糖D3I，用Sephacryl 析和HPLC法分别鉴定其纯度，结果显示只有D11组分为纯度很高的均一多 糖。采用凝胶过滤法测定多糖DlI的分子量为80271，通过GC分析多糖DII 与D3l的单糖组成，结果表明它们均至少由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露 am 糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖组成。UV检测显示油菜花粉多糖Dll于280 处未见有核酸和蛋白特征吸收峰，经IR检测证实多糖Dll与D3I具有多糖类 物质的特征吸收峰。 7．油菜花粉粗多糖、精制多糖对自由基DPPH、02-自由基和·OH自由基均有一 定的清除作用，并且随着多糖浓度的增大清除效果增强。油菜花粉精制多糖 的作用效果大于油菜花粉粗多糖。 关键词：油菜花粉多糖；破壁；分离纯化；抗氧化活性 ⅡI Abstract ABSTRACT Inrecent hasbeenusedasaformoffull foodall the