外植体愈伤组织芽根再生植株脱分化再分化高生长素1D.PPT

第一节 愈伤组织的诱导与分化 一、概念 1.愈伤组织培养 将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 概 念 3.分化 细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官。 4.脱分化 已分化好的细胞在人工诱导条件下，失去特有的结构功能，恢复分生能力的过程。 5.再分化 脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。 二、愈伤组织的诱导 1.什么是愈伤组织的诱导：愈伤组织的诱导就是使已分化的植物细胞脱离原来的发育轨道，失去原有状态和功能，恢复到未分化的状态的过程。 2.不同外植体形成愈伤组织的难易程度 双子叶植物比单子叶植物和裸子植物诱导愈伤组织容易 幼年细胞和组织比成年细胞和组织容易 二倍体细胞比单倍体细胞容易 3.诱导步骤 选取外植体 外植体的处理 培养基诱导 三、愈伤组织细胞的分化 形成愈伤组织的三个时期： 1.诱导期 诱导期是细胞正在准备分裂的时期，是愈伤组织形成的起点。 诱 导 期 （1）影响诱导期长短的因素 植物种类 外植体的生理状况 外部因素：光照、二氧化碳。 植物生长调节剂对诱导期的影响 诱 导 期 （3）诱导期细胞内发生的变化 气体交换增加，如氧气的吸收增加。 RNA含量增加（增加到300%）。 蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%）。 酶活性增强。 分裂期指外植体细胞经诱导脱分化，不断分裂、增生子细胞而形成愈伤组织的过程。 细胞的数目迅速增加。 每个细胞平均鲜重下降。 细胞体积小，内无液泡。 细胞的核和核仁增至最大。 细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变。 随着细胞不断分裂和生长，细胞的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。 细胞分裂快 结构疏松 缺少有组织的结构 颜色浅而透明 维持其不分化的状态 （3）优良愈伤组织的特征 高度的再分化能力 容易散碎 旺盛的自我增殖能力 经过长期继代保存而不丧失再分化能力 3.分化期 分化期是指愈伤组织细胞停止分裂，细胞内发生一系列形态和生理上的变化，形成一些不同形态和功能的细胞的时期。 （1）分化期细胞的特点 细胞分裂部位和方向发生改变。 分生组织瘤状结构和维管组织的形成。 细胞的体积相对稳定，不再减小。 出现了各种类型的细胞。 生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色。 第二节 愈伤组织的继代培养 一、培养基和培养条件 1.培养基 （1）无机营养 氮、钾和磷—细胞过度生长，形成层组织减退。 铁—细胞分裂停止。 硼—细胞分裂停滞，细胞伸长。 锰或钼—影响细胞伸长。 培养基 高：利于形成根 生长素/细胞分裂素 适中：产生愈伤组织 低：利于芽的分化 培养基 （3）有机成分 培养基中加入糖、各类B族维生素、和甘氨酸等，可满足愈伤组织生长和分化的要求。 各种氨基酸和嘌呤、嘧啶类物质，可促进器官分化。 酰胺类往往有促进器官形成的作用。 2.培养条件 （1）光照 在愈伤组织培养中，一般采用全暗、周期性光照、散射性光照三种方式。愈伤组织的诱导需弱光或不需光。继代培养一般需光。器官发生阶段，一般周期性光照比较好。 （2）温度 24-28℃ 二、继代培养物的分化潜力的减弱 1.生理因素 在组织培养过程中，由于植物材料内部的一些变化，而导致继代培养物分化潜力发生变化。 2.遗传因素 在继代培养中通常出现染色体紊乱。 一、不定芽和根的发生 1.生长阶段 外植体脱分化形成愈伤组织，这是外植体发生细胞分裂的结果。 愈伤组织中形成一些分生细胞，形成瘤状结构，这是细胞分化、分化组织出现和有限细胞分裂的共同结果。 器官原基的形成，常由于在某些条件下，分生细胞团发生分化而形成不同的器官原基。 2.愈伤组织的器官发生方式 愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根。 先形成芽，后在其茎的基部长根。 先长根，再从根的基部长芽。 先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株小植株。 3.影响器官分化的因素 激素：生长素和激动素 培养基的物理性质：物理性质、溶解氧、渗透压等。 光照和温度 培养材料的生理状态 二、体细胞胚的发生 指在组织培养中，由体细胞经过胚胎发生和胚胎发育过程，形成的具有胚根、胚芽、胚轴的胚状结构（胚状