沈抚污灌区结冻土壤中微生物群落及石油烃优势降解菌的筛选.docVIP

沈抚污灌区结冻土壤中微生物群落及石油烃优势降解菌的筛选 第22卷第3期 2006年6月 气象与环境 JOURNALOFMETEOROLOGYANDENVIRONMENT Vl01.22No.3 June2006 沈抚污灌区结冻土壤中微生物群落及 石油烃优势降解菌的筛选 杨姝倩李素玉2李法云谯兴国罗岩2张志琼2 (1.辽宁大学环境科学系,沈阳110036;2.辽宁大学生命科学系,沈阳110036) 摘要:针对已有50余年污水灌溉历史的沈抚污灌区石油污染结冻土壤中微生物种群及石油优势降解菌株进行了分离, 筛选及初步鉴定.结果表明:石油污染土壤中的细菌总数是未污染土壤的100倍左右,其真菌和放线茵数量也明显超过未污染 土壤.通过筛选,共得到17株石油烃优势降解细菌和11株真菌,其中,降解性能较强的细菌为12号,石油烃降解率为 30.54%,初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus);降解性能较强的真菌为22号真菌,石油烃降解率为34.21%,初步鉴定为常现青霉 (PenicilliamfreguentansWestling). 关键词:石油污染土壤;优势降解茵;降解能力 利用工业废水和生活污水进行农业灌溉在世界 许多地方已有近百年的历史.污水用于农田灌溉, 一 方面可以缓解当地农业水资源紧缺的矛盾,另一 方面由于污水中含有丰富的N,P,K等,可以供给作 物丰富的营养元素.因此,大型污水灌区主要分布 在我国水资源较少的北方大中城市的近郊区,至 1998年北方地区污灌区面积已扩大到361.8×10 hm2,占全国灌溉总面积的7.3%【. 沈抚污灌区位于沈阳和抚顺的郊区,其上游和 中游地区从20世纪40年代末就已经开始接纳主要 来自抚顺石油二厂的污水灌溉.从1960年开始修 建沈抚灌渠.该灌渠始于抚顺市石油二厂,全长70 km,使污灌范围扩展至沈阳和抚顺两市4个县区的 11个乡镇.到1981年,沈抚污灌区灌溉面积为1.0 ×10hm2,成为中国最大的石油类污水灌区[. 石油污染对土壤生态系统的结构与功能的破 坏,可严重影响土壤的通透性,使土壤肥力下降,从 而对生长的植物产生毒害作用,进而影响土壤的生 产功能,同时也影响土壤中微生物种群的变化.但 是,在污染情况下,也出现了较多的嗜油性菌种,这 为加快土壤中的石油降解,减少土壤中的石油污染 提供了良好的前提条件. 事实上,土壤环境受到气候变化的影响是极为 严重的J.在东北地区,由于气候的原因,一年中土 壤会分为2种状态,即未结冻土壤和结冻土壤.在 未结冻土壤中,由于温度较高,土壤中的有机质较为 丰富,微生物种类和数量繁多,对石油的降解效果也 较好;在结冻土壤中,由于温度很低,土壤中的其他 生物不能存活,导致土壤中有机质含量减少,微生物 种类和数量降低,嗜油菌也会相应较少.目前,国内 对在土壤结冻条件下的石油污染土壤中的微生物及 优势菌的研究甚少. 本文通过对沈抚污灌区结冻状态下石油污染土 壤中的微生物类群及对石油降解微生物的研究,筛 选出在低温条件下降解石油能力强的优势菌株,为 建立起一套在低温环境下切实可行的石油污染土壤 的生物降解技术提供科学依据[. 1材料与方法 1.1土壤样品采集 供试土壤于2005年12月20El采自沈抚污灌 区的康红村实验田(41.38.459N,123.20.516E),共 采集4个土壤样品.分为2类:(1)石油污染土壤, 除去表层土10cln后每隔10cln向下取一个样品至 50cm处,共采集3点,分别定为A,B,C(三点在一 条直线上,相距50m);(2)未污染土壤,采自辽宁大 学校园内的草坪.将土样带回实验室后,经碾碎,过 筛,混匀后装入试剂袋密封后,放入冰箱,4℃保存 备用. 1.2土壤理化性质测定 收稿日期:2006—04—13;修订日期:2006—05—08. 基金项目:国家自然科学基金(N0和国家教育部留学回国人员科研启动资金(教外司留-)共同资助. 作者简介:杨姝倩,女,1982年生,硕士研究生,主要从事污染生态学方面的研究. 通信作者:李法云,教授,E—mail:lifayun@lnu.edu.crl. 第3期杨姝倩等:沈抚污灌区结冻土壤中微生物群落及石油烃优势降解菌的筛选55 采用常规方法测定土壤的含水量和pH值,土壤 有机质含量采用K2cro4一H2SO4氧化法测定. 1.3土壤中总石油烃(Totalpetroleumhydrocar- bons/I1PIIs)的提取及测定 将采集的土样风干过1ITLrn筛,称取10g土样, 置于50Inl玻璃离心管中,加入20ml正己烷,置于 超声水浴中超声提取20min,4000r?min离心 5min,收集上清液,再加入20ml二氯甲烷继续超声 提取20min,4