高中生物选修一课题1---DNA粗提取和鉴定.pptVIP

专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识分析 （一）DNA的提取原理 1、DNA的溶解性 　　DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 问题思考与讨论： 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 　　 NaCl浓度为 0．14 mol／L时DNA的溶解度最低。小于或大于0.14 mol／L ，溶解度就逐渐增大。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 　　DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 2、DNA在酒精溶液中的溶解性 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋 白质,但对DNA没有影响 （二）、DNA的鉴定原理 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②甲基绿 （绿色） 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？ 哺乳动物的红细胞和液体培养基中的大肠杆菌 从核DNA数目来看，猪38条，鸡血78条，哺乳动物红细胞0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 最好选择？ 鸡血、猕猴桃 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞【鸡血细胞】 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2、植物细胞【洋葱】 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状 沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等. 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质. （三）去除滤液中的杂质 【阅读方案一】 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开； 【酶的专一性】 方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 【DNA的稳定性】 【阅读方案二、三】 （四） DNA的析出与鉴定 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％） 1、DNA的析出 2、 DNA的鉴定 DNA＋二苯胺 甲基绿 沸水浴 蓝色 绿色 讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？ （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是DNA 以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 三、实验案例 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 鸡血细胞做实验材料的原因 ①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得 1、准备鸡血细胞液 ①过程： ②柠檬酸钠作用: 讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液中的上清液？ 答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部 分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆. 取柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。 防止血液凝固 将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL烧杯中。取其滤液。 2、提取鸡血细胞的细胞核物质 讨论： 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至涨破 （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？ （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA （3）滤去的是什么物质？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质； 得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA 3、溶