药典动态对药品制剂研发影响及原始记录常见问题讨论 知识讲稿.pptVIP

毛细管电泳法检查特定杂质 抑肽酶由上海药检所起草，参考USP增订去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶检查项 色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：30℃，电极液：磷酸二氢钾溶液；分离压：12KV；波长：214nm 结果：去丙氨酸抑肽酶RT为0.99，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶RT为0.98，两相关物间分离度1.40，去丙氨酸-抑肽酶与抑肽酶间分离度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8 抑肽酶SDS凝胶电泳图  本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。 采用SDS凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结果如图所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离 药典采用现代分析技术举例 首次运用柱串联技术-抑肽酶 参照USP32用三根TSK柱串联检查高分子蛋白质。采用分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（TSK-G4000SWXL柱）柱温35℃，流速1.0ml/min,二聚体RT0.9，与主峰分离度1.4，主峰拖尾因子0.91。 药典采用现代分析技术举例 柱串联技术 适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，通过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MGⅡC18长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。 原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCX短柱的离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入C18长柱中，从而成功分离；然后由于MGⅡC18长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。 药典采用现代分析技术举例 首次运用肽图分析技术： 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，再通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，用此法进行鉴别，专属性强，可鉴别仅相差一个氨基酸残基的不同种属来源的样品。 如胰岛素-采用V8酶解+HPLC法； 重组人生长激素-采用胰蛋白酶酶解+HPLC法获得肽图进行鉴别等。 胰岛素肽图 人胰岛素酶解-HPLC肽图 猪胰岛素酶解-HPLC肽图 电泳法-等电聚焦水平板电泳法 琼脂糖凝胶电泳法 醋酸纤维素薄膜电泳法 纸电泳法 等点聚焦水平板电泳法 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 典型的等电聚焦图谱 重组人生长激素（二部第566页）用此法做鉴别 附录通用检测方法中的变化提示 澄清度检查法： 增加“几乎澄清”的定义：0.5号～1号 溶液颜色检查法 恢复“无色或几乎无色”的定义 性状颜色描述与颜色检查项匹配：原有些液体制剂品种颜色检查项规定“与黄色2号标准比色液比较，不得更深”，但性状描述为“无色或几乎无色的澄明液体”，与附录定义不匹配，现修订为“无色至微黄色的澄明液体”。 本版药典中极个别品种仍然存在此问题！尼莫地平注射液 药典附录变化提示 －钠盐的鉴别反应 重金属检查法： pH测定法： 不溶性微粒检查法： 可见异物检查法： 渗透压摩尔浓度： 2010年版 2005年版 钠盐 （1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。 （2）取供试品约100mg，置10 ml试管中，加水2 ml溶解，加15%碳酸钾溶液2 ml，加热至沸，应不得有沉淀生成；加焦锑酸钾试液4 ml，加热至沸；置冰水中冷却，必要时，用玻棒摩擦试管内壁，应有致密的沉淀生成。 （替换使用醋酸氧铀锌试液的方法） （1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。 （2）取供试品的中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。 药典附录变化提示 －锌盐的鉴别反应 重金属检查法： pH测定法： 不溶性微粒检查法： 可见异物检查法： 渗透压摩尔浓度： 2010年版 2005年版 锌盐 （1）取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶解。 （2）取供试品溶液，制成中性或碱性溶液，加硫化钠试液，即产生白色沉淀。 （替换使用硫氰酸汞铵试液的检查方法） （1）取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶解。 （2）取供试品溶液，以稀硫酸酸化，加0.1％硫酸铜溶液1滴及硫氰酸汞铵试液数滴，