细菌内毒素检查法教学课件.pptVIP

从实验可以看出，温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，保温温度在25～41℃之间，随着温度的升高，反应速度也升高，41℃尚未达到反应速度峰值，25℃ 时反应速度已相当快；在41～46℃之间，温度对鲎试剂的灵敏度无明显影响；达到49℃或更高温度时，随温度升高而使酶蛋白逐渐变性，则鲎试剂被破坏，反应速度反而降低。 2）、保温时间 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成2λ，进行鲎试验，37℃保温，分别在10、20、30、40、50、70min时观察，发现凝胶的形成状态随着时间的延长而坚固。 因此夏天室温较高，如果试验操作时间太长，细菌内毒素与鲎试剂混合液不等进入反应仪器反应已开始，实际反应时间超过1小时。由于室温不同，冬夏季节、南北地区之间的操作误差将会很大。即使在25℃准室温下操作，操作时间拖得过长，细菌内毒素含量较高时，测定误差也不会小。 成功案例： 1、头孢吡肟 2、盐酸土霉素、土霉素 3、喹诺酮类输液 4、血液保存液、红细胞保存液 3）、金属离子和弱酸阴离子 离子对细菌内毒素测定结果影响较大，一方面阳离子如Fe3+、Al3+强度较大会引起内毒素的聚集造成内毒素局部浓度过高，同时还必须注意高价阳离子（如Fe3+）的氧化性对鲎试剂酶反应具有强抑制作用；重金属离子如Ag+、Cu2+、Pb2+可以使蛋白质变性而使酶失活；另一方面鲎试剂必须在二价阳离子Ca2+、Mg2+的参与下才能被激活形成凝胶反应。 许多药物因PH值≥10时，其中的阴离子会吸收鲎试剂中的 Ca2+、Mg2+离子，使实验呈假阴性。 成功案例： 1、碳酸氢钠注射液 2、乙肝疫苗 3、注射用果糖二磷酸钠 4）、药物浓度 1、10%葡萄糖注射液 2、白蛋白、小牛血清 3、医用透明质酸钠 4、中药类注射液 5、实验员的影响 操作时严格按操作规程进行，安瓿开启前应先用酒精棉球擦拭曲颈部，用将颈部折断，防止碎玻屑掉入安瓿内。在鲎试剂的溶解、样品的稀释及加样时，取样均应准确。如果一人独立完成试验，可先稀释配制好内毒素标准溶液和样品溶液，然后开启复溶鲎试剂，最后加样，尽可能缩短鲎试剂溶液暴露在空气中的时间（最好控制在15分钟内）。 6、环境的影响 保温时间 保温温度 1）、保温温度 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成2λ，进行鲎试验，然后分别放置于25、28、31、34、37、41、43、46、49℃水浴保温。实验中观察到凝胶形成的速度随着温度的升高而加快，但到达49℃保温90min也未出现凝胶。 三、企业产品优势 　 1、能准确判断假阳性 用本企业研制生产的定量鲎试剂第一家准确无误地检测出了内毒素与葡聚糖二者之间的区别，并公布了内毒素与非内毒素反应曲线。截止目前，还没有第二个品牌的鲎试剂将假阳性区别出来，其他国内外研究机构也未公布同类型曲线。 ? 对于假阳性的鉴别已经远远走在了世界同行业的前面。 2、对外交流历史悠久，全面掌握中美两国鲎试剂的区别 1）对外交流我公司历史最悠久、交流技术最全面； 2）我公司掌握了中国和美国鲎试剂的全面区别； 3）用美国和中国的内毒素标准品，我公司鲎试剂标示灵敏度都相当准确。 4）通过十多年的技术交流结果显示，本公司的鲎试剂与美国同类产品质量相比没有任何差别，而且个别项目要优于美国产品。 三、售后技术服务专业，技术优势明显 细菌内毒素检查法在我国已开展了十多年，经过许许多多专家学者的努力，目前该行业已经取得了非常重要的成果，但是该领域仍然有许多我们无法解决问题的存在，它并不想我们想象的那么简单，这些问题的存在严重阻碍了该行业的进一步发展，我们将与客户的交流以及客户咨询的相关问题，进行一次归纳总结。通过工作中出现的问题有必要对以下情况进行交流，以加强对细菌内毒素检查法的正确理解，同时纠正一些错误的观念。 * * 实验注意事项及影响试验结果的因素分析 一、实验注意事项 二、影响试验结果的因素分析 三、企业产品优势 一、试验操作注意事项 ——2005年版《中国药品检验标准操作规程》P297细菌内毒素检查法 实验前，须用肥皂洗手，用75％酒精棉球消毒。 在使用洗耳球、移液管取样时，应注意不要将洗耳球中的气体吹入溶液中，以防止气体中的内毒素进入供试液。 复溶0.5ml鲎试剂时，在旋涡混合器上点击1-3秒，促进鲎试剂的溶解。 由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果。 进行干扰实验时，标准对照系列和含内毒素的供试品溶液系列应同时进行，并使用同一支细菌内毒素标准品。 在进行鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和供试品细菌内毒素检查时，各个实验中要求的对照应同时进行，并在实验有效的情况才能进行计算和判断。 在进行鲎