rphplc法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸a含量及药物动力学分析-determination of aristolochic acid a in gentian xiegan preparation by rp hplc and its pharmacokinetic analysis.docxVIP

阳-HPLC法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸A含量及其药物动力学研究摘要1.RP唰HPLC法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸A含量龙胆泻肝为我国中药方剂中传统名方，也是中国药典2000年版一部收载的品种。该方剂包括三种制剂即丸剂〈水丸、蜜丸〉、口服液和片剂，均由龙胆、柴胡、黄苓、梳子、泽泻、木通、车前子、当归、地黄、炙甘草组成，具有清肝胆，利湿热的功效，临床用于治疗肝胆湿热，头晕目赤，耳鸣耳聋，耳肿疼痛，协痛口苦，尿赤涩痛F湿热带下。然而，自从美国食品和药品管理局(FDA)公布通告禁止含马兜铃酸A或怀疑含马兜铃酸A的药剂的生产、销售、进口以来，很多国家都限制了含马兜铃酸A药剂的使用。按照这一通告，龙胆泻肝丸〈水丸、蜜丸〉、口服液和片剂均在受禁之列。我国国家药品监督局己作出慎用龙胆泻肝丸的规定d广大医务工作者已经在慎重对待或研究其毒性。龙胆泻肝方剂中含有的马兜铃酸A具有一定的肾毒性，尤其是马兜铃酸A在体内可以蓄积。则深入研究制剂中含有的马兜铃酸A的多少具有重要的临床意义。目的s采用反相高效液相色谱法测定龙阻泻肝丸(水丸〉、口服液和片剂中马兜铃酸A的含量，以比较它们含有的马兜铃酸A量的差异。方法:(1)提取:龙胆泻肝丸〈水丸〉和其片剂细粉以甲醇索氏回流提取后，蒸干溶剂，残渣用0.5%的氢氧化纳溶液溶解，酸化后用氯仿分次振摇提取(龙胆泻肝口服液直接酸化用氯仿提取)，将提取液蒸干，甲醇溶解。(2)色谱条件:选择合适的固定相，调整流动相的组成、配比、流速以便马兜铃酸A色谱峰分离完全。(3)系统适用性试验:在确定的色谱条件下，考察马兜铃酸A色谱峰的分离度、理论板数、对称度等是否符合要求。(4)标准曲线的制备:配制系列浓度的马兜铃酸A对照品溶液，分别进样测定峰面积，以马兜铃酸A对照品溶液浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线(5)最低检测限试验:逐步稀释马兜铃酸A对照品溶液，进样，直至马兜铃酸A色谱峰的峰高为噪声三倍。(6)稳定性试验:取供试品溶液分别放置0，2，4，6，8，10，12h后，按己确定的色谱条件测定峰面积。(7)精密度试验:取龙胆泻肝丸(水丸)，制备供试品溶液，按己确定的色谱条件重复进样5次，记录峰面积。(8)重现性试验:取同一龙胆泻肝丸〈水丸)5份，制备供试品溶液后，进样，测定马兜铃酸A的含量。(9)回收率试验:依次取龙胆泻肝丸〈水丸〉的细粉适量，分别加入马兜铃酸A对照品溶液，进样，测定马兜铃酸A的含量。(10)样品含量测定z分别取龙胆泻肝丸(水丸〉、龙胆泻肝口服液、龙胆泻肝片，制备供试品溶液，进样，按外标法计算马兜铃酸A的含量。结果:(1)最佳色谱条件:Cl8色谱柱，紫外检测器p2以甲醇·水-冰醋酸(59:40:1)为流动相，检测波长为315nm，流速为1.0ml+min-l，柱温为25?C，灵敏度:l.OAUFS，进样量为20μ10(2)系统适用性试验:在上述色谱条件下，马兜铃酸A峰形良好，无杂质峰干扰，其理论塔板数大于4000，不对称因子为0.98--1.16，保留时间为18.9mín左右，与相邻色谱峰的分离度均大于3口(3)标准曲线的绘制:马兜铃酸A浓度在1.33--26.6问mrl范围内与峰面积有良好的线性关系，回归方程为y==0.4105X+0.8714，相关系数r=O.9995(n=8)o(4)最低检测限:最低检测浓度为1.33ng.mr1o(5)样品稳定性试验:样品溶液在12h内稳定。(6)样品精密度试验:重复进样5次后，峰面积的RSD为0.77%0(7)样品重现性试验:马兜铃酸A含量的相对标准偏差为2.74%，重现良好。(8)回收率试验2样品的平均回收率为98..61%0RSD为0.34%0(9)含量测定结果:龙胆泻肝丸〈水丸)中马兜铃酸A的量为0.0125%，龙胆泻肝片中马兜铃酸A的量为0.0006%，龙胆泻肝口服液中马兜铃酸A的量为0.0013mgmr1o结论z龙胆泻肝丸〈水丸〉中马兜铃酸A含量最高，而龙胆泻肝口服液及片剂含马兜铃酸A则较低，可能与生产工艺或与川木通混用有关。关键词:RP幽，HPLC，龙胆泻肝，马兜铃酸A，含量测定32.龙胆泻肝丸〈水丸〉中马兜铃酸A药物动力学研究本文通过比较关木通及其复方制剂龙胆泻肝丸〈水丸)的药代动力学特点，研究他们中马兜铃酸A在体内的吸收、分布、消除规律，对临床合理用药和探索马兜铃酸A的毒副作用具有重要意义。目的:研究关木通及龙胆泻肝丸(水丸〉中马兜铃酸A在动物体内药物动力学特征，以比较马兜铃酸A吸收、分布、消除的差异。方法:(1)试验动物:SD大鼠，体重约250g费雌雄各半。(2)血药浓度测定方法:采用RP-HPLC测定血浆样品中马兜铃酸A的浓度。(3)色谱条件的确定:选择固定相声并对流动相的组成、配比、流速等因素进行分析步确定色谱条件。(4)血浆样品的预处理:取大