salusinα基因真核表达载体的构建及在hek293细胞中的表达-construction of eukaryotic expression vector of salus in α gene and its expression in hek 293 cells.docxVIP

transfectiongroup,andrecombinantplasmidtansfectiongroup.TheSalusin-ageneexpressioninHEK293cellswasanalysisedbyfluorescenceintensityandRT-PCR.RESULTS:Salusin-alevelsinthecoronaryarterydiseasegroupswerelowerthancontrols.Serumsalusin-alevelswerereducedaccordancewiththeGensiniscore.ThepEGFP-Salusin-aplasmidwassuccessfullyconstructed.TheefficiencyofpEGFP-Salusin-atransfectedintoHEK293cellswasabout86%.AndwefoundthatbothfluorescenceintensityandSalusin-amRNAofemptyplasmidtransfectiongroupandrecombinantplasmidtansfectiongroupweresignificanthigherthanthecontrolgroup.CONCLUSIONS:Serunsalusin-alevelsweresignificantlylowerincoronaryarterydiseasepatients.ThepEGFP-Salusin-acanbetransfectedintoHEK293cellsandexpressed,whichprovideaexperimentalbasetoresearchtheSalusin-agenefunction.KEYWORDS:Salusin-a;eukaryoticgreenfluorescentproteinexpressionvector;HEK293cells;transfection独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日Salusin-a基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达前言近年来，人们通过基因组技术发现了大量的编码细胞表面孤立G蛋白偶联受体和一些编码分泌蛋白的cDNA序列，表明了世界上还有许多未发现的激素肽的存在[1]。通过系统的生物化学研究发现了一部分信号分子，且它们通常作为独立受体的内源性配体所存在[3]。尽管通过生物信息学方法可缩短寻找生物活性肽的过程[4]，但基因的选择性剪切功能又加剧了蛋白的多样性，同时也对生物信息学和基因生物学的研究带来挑战[5]。生物活性肽的共同结构是寻找新的DNA序列的基础。生物活性肽首先形成前蛋白原，然后通过信号肽的分裂形成前蛋白[6]。几乎所有的前蛋白通过多种激素原转化酶处理后都分裂为二碱基氨基酸残基，并且进一步受羧肽酶和酰胺单加氧酶（PAM）的加工处理[7]。羧肽酶转移C端氨基酸残基，PAM使C端的甘氨酸转化为NH2，生成酰胺化的肽[8-9]。典型的生物活性肽的前蛋白原的单核苷酸长度为90到250个残基。根据以上这些共同的结构特征就可以从人类cDNA文库中寻找新的生物活性肽[10]。Salusins是生物信息学方法新发现的一种生物活性肽，人类扭转应力障碍基因（TOR2A）的选择性剪接使之分别形成28个和20个氨基酸残基编码的肽分子Salusin-a和Salusin-β[11]。Shichiri[11]通过事先假设的蛋白序列融合ATGpr[20]、PSORT[21]程序和SignalP公式发现了促进有丝分裂和血流动力学活性的两个肽[21]。SingnalP公式是预测单核苷酸序列信号肽切割位点的存在和位置，PSORT程序是利用广泛的扭曲蛋白知识预测亚细胞蛋白的定位，二者均可从假定的分泌肽中挑选152个克隆[21]。假定通过是否可以增加培养细胞内游离