醒脑静对脑缺血再灌注损伤后自噬相关基因beclin1 lc3及凋亡相关基因bcl-2表达的影响-effect of xingnaojing on expression of autophagy related gene be clin lc3 and apoptosis related gene bcl - 2 after cerebral ischemia-reperfusion injury.docxVIP

醒脑静对脑缺血再灌注损伤后自噬相关基因Beclin1、LC3及凋亡相关基因BCL-2表达的影响中文摘要目的：用自噬抑制剂3-methyladenine和自噬诱导剂rapamycin(雷帕霉素)探讨醒脑静注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后自噬相关基因Beclin1、LC3与凋亡相关基因Bcl-2表达的影响及其可能的神经保护作用机制。方法：健康雄性SD大鼠随机分成a、b、c、d、e、f、g、h、i九个组，a组为假手术组(sham，仅分离血管但不进行其他操作)、b组为缺血组1、c组为缺血组+溶媒组（简称溶媒组）、d组为缺血组+自噬抑制剂3-methyladenine(简称3MA组)、e组为缺血组+自噬诱导剂rapamycin(简称雷帕组)、f组为缺血组+醒脑静（简称醒脑静组）、g组为缺血组+醒脑静+自噬抑制剂（简称醒脑静+3MA组）、h组为缺血组+醒脑静+自噬诱导剂（简称醒脑静+雷帕组）、i组为缺血组2。采用改良Longa线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middlecerebralarteryocclusion,MCAO）模型，插线后2h拔出栓线，实行再灌注(假手术组仅暴露血管不做缺血再灌注)。再灌注后给予鼠尾静脉注射溶媒、自噬抑制剂、自噬诱导剂、醒脑静注射液（持续给药3d，1ml/1次/d）。采用Zealonga报道的评分法，术后24h观察大鼠行为学症状评分；各组大鼠在末次给药后12h后取脑组织，采用HE染色观察脑组织病理学变化，TUNEL染色方法检测脑组织细胞凋亡情况，免疫组织化学SP法检测各组Beclin1、LC3、Bcl-2的表达水平，透射电镜观察脑缺血再灌注损伤后神经细胞内自噬体的形成。结果：HE染色结果显示：假手术组细胞结构正常，其他各模型组大鼠右侧脑组织出现明显的病理改变，镜下可见神经细胞排列紊乱，界限不清楚，胞体肿胀，胞浆疏松，核体不规则，有明显软化灶形成，周边可见炎性细胞浸润，溶媒组与缺血组比较无明显差异，而醒脑静组、3MA组、醒脑静+雷帕霉素组较缺血组、醒脑静+3MA组、雷帕霉素组病理变化得到明显改善。免疫组化显示:Beclin1在各模型组的表达高于假手术组，着色加深，免疫反应性增强(P＜0.05)，在醒脑静组、3MA组、醒脑静+3MA组表达低于缺血组、雷帕霉素组、醒脑静+雷帕霉素组(P＜0.05)。LC3在各模型组的阳性率高于假手术组(P＜0.05)，在醒脑静组、3MA组、醒脑静+3MA组表达低于缺血组、雷帕霉素组、醒脑静+雷帕霉素组(P＜0.05)。Bcl-2在各模型组的表达高于假手术组(P＜0.05)，在醒脑静组、醒脑静+雷帕霉素组表达明显高于缺血组。TUNEL染色显示：凋亡神经元阳性细胞主要见于梗死灶周围的纹状体及额顶部皮质，假手术组有少量凋亡细胞存在，醒脑静组阳性细胞数相对较其他模型组低。透射电镜结果显示缺血组可见明显的自噬体形成。透射电镜结果显示：神经细胞排列紊乱，可见大量空泡和液化灶，双层膜囊泡内包裹了部分胞浆物质，胞膜轮廓不清，线粒体肿胀变形，有时可见自噬体包裹的线粒体残体，细胞核固缩，可见大量吞噬体。结论：脑缺血再灌注损伤后有自噬体参与，在大鼠脑缺血再灌注损伤后自噬相关基因Beclin1、LC3与凋亡相关基因Bcl-2的表达较假手术组均上调；醒脑静注射液能上调Bcl-2，下调Beclin1、LC3，减少凋亡细胞，减轻脑组织病理改变，减轻了脑缺血再灌注损伤；醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，可改善神经功能缺失，可能与上调Bcl-2，下调Beclin1、LC3相关。关键词：醒脑静注射液，脑缺血再灌注，Beclin1,Bcl-2,LC3Xingnaojingoncerebralischemia-reperfusioninjuryAutophagyrelatedgeneBeclin1,LC3andapoptosisrelatedgenesaffectBcl-2expressionABSTRACTObjective:Withtheautophagyinhibitor3-methyladenineandautoph-agyinducerrapamycin(sirolimus),weinvestigatexingnaojingoncerebralischemia-reperfusioninjuryautophagy-relatedgeneBeclin1,LC3andapoptosis-relatedaffecttheexpressionofBcl-2geneanditspossibleneuroprotectivemechanismofactionMethods:HealthymaleSDratswererandomlydividedintoa,b,c,d,e,f,g,h,ieightgroup