醒脑液对appsweps1δe9双转基因小鼠脑内aβ及其降解酶nep表达的影响-effect of xingnao liquid on expression of a β and its degrading enzyme nep in brains of apps weps 1δ e9 transgenic mice.docxVIP

独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的本课题拟从研究β-淀粉样蛋白（Aβ）及其降解酶Neprilysin（NEP）基因和蛋白表达着手，探讨中药复方醒脑液（XNY）对APPswe/PS1ΔE9的双转基因小鼠大脑内Aβ蛋白及其降解酶NEP表达的影响，并同时从中医痴呆理论角度分析复方醒脑液的作用机制，从而为临床治疗阿尔茨海默病（AD）提供深层分子机制和理论依据。方法利用Morris水迷宫分别观测正常对照组、模型组、西药对照组、醒脑液高剂量组、醒脑液中剂量组和醒脑液低剂量组小鼠空间学习记忆能力；采用免疫组织化学方法检测各组小鼠大脑组织中老年斑的表达情况；采用实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠大脑组织中NEPmRNA的表达；以免疫蛋白印迹Westernblots法分别观测各组小鼠大脑组织中NEP蛋白的表达情况。实验结果皆以均数??标准差表示（x±s），组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA），P0.05为有统计学意义，P0.01为有显著统计学意义。结果SPF级75只健康雄性三月龄双转基因痴呆小鼠，15只雄性同月龄正常小鼠。Morris水迷宫结果显示：游泳持续时间模型组明显高于正常组，差异具有统计学意义（P0.05）。西药组和XNY高剂量组明显低于模型组，差异具有统计学意义（P0.05）。第四象限持续时间模型组明显低于正常组（P0.05），阳性对照组、XNY高剂量组、XNY中剂量组高于模型组（P0.05）；免疫组织化学法结果显示：显微镜下观察老年斑为淀粉样物质且呈棕色，广泛分布于小鼠大脑组织中海马及皮层部位。模型组老年斑数目较多，面积较大。经统计，小鼠脑组织中老年斑累积光密度值由高到低依次为模型组、XNY低剂量组、XNY中剂量组、XNY高剂量组、阳性对照组。阳性对照组、XNY高剂量组明显低于模型组，差异具有统计学意义（P0.01）；实时荧光定量PCR结果显示：小鼠大脑组织中NEPmRNA表达的含量由高到低依次为正常组、西药组、XNY高剂量组、XNY中剂量组、XNY低剂量组、模型组。模型组与正常组之间的差异有统计学意义（P0.01）。西药组和XNY高剂量组明显高于模型组，差异有统计学意义（P0.05）。XNY中剂量组和XNY低剂量组与模型组之间的差异无统计学意义（P0.05）。西药组与XNY高剂量组之间的差异无统计学意义（P0.05）。XNY中剂量组和XNY低剂量组与XNY高剂量组之间的差异有统计学意义（P0.05）；免疫蛋白印迹法结果显示：小鼠大脑组织中NEP蛋白表达的含量由高到低依次为正常组、西药组、XNY高剂量组、-I-河北联合大学硕士学位论文XNY中剂量组、XNY低剂量组、模型组。模型组与正常组之间的差异有统计学意义（P0.01）。西药组和XNY高剂量组、XNY中剂量组明显高于模型组，差异有统计学意义（P0.05）。XNY低剂量组与模型组之间的差异无统计学意义（P0.05）。结论中药复方制剂醒脑液能有效改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能和提高其学习记忆能力，降低小鼠大脑组织中海马及皮层部位老年斑的沉积，上调大脑组织中性内肽酶基因和蛋白的表达。醒脑液的作用机制可能与干预淀粉样蛋白的代谢过程，并促进脑内中性内肽酶的活性，进而加速脑内毒性蛋白的降解或间接抑制其生成有关。图7幅；表7个；参89篇。关键词：醒脑液；阿尔茨海默病；老年性痴呆；β-淀粉样蛋白；老年斑；中性内肽酶分类号：R256.23II-摘要AbstractObjectivesThroughresearchinggeneandproteinexpressionofthebetaamyloidprotein(Abeta)anditsdegradationenzymeNeprilysin(NEP),thistopicstudiedtheeffectofTraditionalChinesemedicinecompoundXNYonexpressionofAβandAβ