血必净对大鼠急性肺损伤后肺纤维化的干预效应分析-effect of xuebijing on pulmonary fibrosis after acute lung injury in rats.docx

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血必净对大鼠急性肺损伤后肺纤维化的干预效应分析-effect of xuebijing on pulmonary fibrosis after acute lung injury in rats

血必净对大鼠急性肺损伤后肺纤维化的干预效应研究硕士研究生:汪友平导师:梁子敬教授中文摘要背景和目的急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)和是临床常见的急重症,也是心源性以外的各种肺内外致病因素所致的急性、进行性缺氧性呼吸功能衰竭;严重阶段为急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)。持续急性呼吸窘迫综合症(ARDS)是以肺纤维化增强,进行性的炎症、长时间的机械通气和高死亡率为特征。临床上先后尝试过多种药物,如糖皮质激素、肺泡表面活性物、前列腺素E(PGE)、环氧化酶抑制剂、N一乙酰半胱氨酸和丙半胱氨酸、细胞因子单克隆抗体或拮抗剂、己酮可可碱及其衍化物利索茶碱、重组人活化蛋白C(rhAPC或称Drotrecoginah)、酮康唑、鱼油,但效果均不尽人意。大量的研究试图应用糖皮质激素控制炎症反应,预防和治疗ARDS,但结果一直存在争议。最近认为,尽管糖皮质激素可能对改善心肺生理有益但是对患者远期预后无改善,认为不支持对持续ARDS常规使用皮质激素,相反认为在出现ARDS后使用激素超过2周可能会增加患者死亡风险。目前而言仍没有一种药物对此有确切疗效,为此我们尝试用中药制剂血必净对油酸诱导大鼠急性肺损伤的干预作用进行探讨。已有的研究表明,ALI/ARDS早期即可出现纤维化,而肺纤维化对病情进展及预后有显著影响。国内有研究发现中成药血必净对急性肺损伤相关性肺纤维化治疗可能有益。本研究旨在:①通过检测与纤维化相关的标志物Ⅲ前胶原(PCⅢ)及羟脯氨酸(HYP)含量,探讨大鼠急性肺损伤后肺纤维化的发展进程;②通过给予血必净对油酸性诱导ALI大鼠进行干预,探讨其可能的作用机制和疗效。方法将健康SPF级雄性Wistar大鼠60只,随机分为三大组(n=20):正常对照组(A组)、油酸模型组(B组)、油酸模型+血必净组(C组)。A组注射生理盐水作为正常对照;B、C两组所有大鼠均用油酸(0.13mL/kg)复制急性肺损伤模型,B组为模型对照组,C组在模型基础上加用血必净为干预组。三组均于注射造模后12h抽动脉血作血气分析测定血氧分压,确定模型成功后,A、B两组经尾静脉注射生理盐水(4mL/kg),C组经尾静脉给予血必净注射液(4mL/kg),每天一次,连续给药7天,各组于给药后第1d、7d、14d、28d先取心脏血处死后取肺组织(每组5只),左肺称湿重后行支气管肺泡灌洗,灌洗后烘干称重。右肺下叶用碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;酶联免疫法(ELISA)检测血清和支气管肺泡灌洗液Ⅲ前胶原(PCⅢ)浓度。留取右肺上叶行肺组织病理学检查,经石蜡包埋切片后分别行苏木素-伊红(hematoxylin-eosine,HE)染色和Masson染色(纤维结缔组织特殊染色法)。结果(1)与正常对照组(A组)相比,模型组(B组)和血必净治疗组(C组)两组动脉血氧分压(PaO2)明显下降(P<0.05),肺湿/干(W/D)比值明显升高(P<0.05),但B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)A24h组、A7d组、A14d组、A28d组、B24h组、B7d组、B14d组、B28d组、C24h组、C7d组、C14d组、C28d组肺组织羟脯氨酸含量分别为:(0.503±0.045)μg/mg、(0.513±0.025)μg/mg、(0.525±0.027)μg/mg、(0.602±0.017)μg/mg、(0.527±0.029)μg/mg、(0.880±0.015)μg/mg、(1.149±0.049)μg/mg、(1.344±0.036)μg/mg、(0.512±0.036)μg/mg、(0.706±0.022)μg/mg、(0.941±0.017)μg/mg、(1.023±0.037)μg/mg。B组和C组在7天、14天、28天三时点肺组织HYP值与同时点A组比较明显增加(P<0.01),C14d亚组和C28天亚组与同时点B14d、B28d相比肺组织HYP含量明显减低,(P<0.05)有统计学意义。(3)血清PCⅢ浓度在A24h组、A7d组、A14d组、A28d组、B24h组、B7d组、B14d组、B28d组、C24h组、C7d组、C14d组、C28d分别为(15.26±0.12)ng/mL、(15.16±0.36)ng/mL、(14.97±0.35)ng/mL、(14.95±0.25)ng/mL、(15.13±0.32)ng/mL、(18.61±0.029)ng/mL、(20.40±0.51)ng/mL、(21.32±0.43)ng/mL、(15.37±0.43)ng/mL、(17.49±0.22)ng/mL、(18.89±0.31)ng/mL、(19.21±0.25)ng/mL。血

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