临床生物化学检验与分子诊断学.docVIP

临床生物化学检验与分子诊断学实验指导 （供五年制医学检验本科专业使用） 广东医学院 临床生物化学教研室 20年12月 目 录 实验一 生物化学检验实验基本操作 1 实验二 Hanes作图法测定兔血红细胞过氧化氢酶的Km值 6 实验三 凝胶过滤法分离蛋白质 8 实验四 PCR扩增DNA 11 实验五 分子诊断学实验基本操作及样品蛋白定量 17 实验六 Western –blot技术：SDS 18 实验七 Western –blot技术：电转移 21 实验八 质粒DNA的转化 23 实验九 质粒DNA的制备 28 实验十 DNA的限制性内切酶酶切分析 34 实验十一 RT-PCR法钓取小鼠肝脏β-actin基因 38 实验十二 全血基因组DNA提取 实验十三 核酸定量 实验一 生物化学与分子生物学实验基本操作 一、实验记录及实验报告的书写 生物化学与分子生物学实验是在生物化学与分子生物学理论及有关理论指导下的实践。实验目的在于经过实践掌握科学观察的基本方法和技能，培养科学思维、分析判断及解决实际问题的能力，培养尊重科学事实和真理的学风和科学态度。当然，通过实验还可以加深和扩大对生物化学与分子生物学理论的认识。 为了达到实验的目的，要求学生在实验前进行预习，通过预习对实验的内容、目的要求、基本原理、基本操作及注意事项有初步的了解；要求学生在实验中合理组织安排时间，严肃认真地进行操作，细致观察各种变化并如实做好实验结果的记录；还要求学生在操作结束后认真进行计算或分析，写好实验报告。 （一）实验记录 实验记录应及时、准确、如实、详尽、清楚。 “及时”是指在实验中将观察到的现象、结果、数据及时记录在记录本（或《实验指导》合适位置）上。回顾性的记录容易造成无意或有意的失真。 实验结果的记录不可掺杂任何主观因素，不能受现成资料及他人实验结果的影响。若出现“不正常”的现象，更应如实详尽记录。 表格式的记录方式简练而清楚，值得提倡使用。如无专用的记录本，可分项记录于《实验指导》中相应的操作项目之下。记录时字迹必须清楚，不提倡使用易于涂改及消退的笔、墨做原始记录。 完整的实验记录应包括日期、题目（内容）、目的、操作、现象及结果（包括计算结果及各种图表）。使用精密仪器进行实验时还应记录仪器的型号及编号。 （二）实验报告 实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。 完整的实验报告应包括实验名称、实验日期、目的要求、实验原理、试剂、仪器设备、操作方法、实验结果、讨论等多项内容。 其中，目的要求、原理、设备、试剂及操作方法等项只要求作简明扼要的叙述，不必也不应将《实验指导》原版抄录一遍。但对实验的条件、操作要点等实验成败的关键环节应作清楚描述。 实验结果首先是如实记录实验中观察到的现象及各种原始数据，还应包括根据实验要求整理、归纳数据后进行计算的过程及计算结果，包括根据实验数据及计算做出的各种图表（如曲线图、对照表等）。 讨论部分不是对结果的重述，而是对实验结果、实验方法和异常现象进行探讨和评论，以及对实验设计的认识、体会及建议。 一般要有实验结论。结论要简单扼要，以说明本次实验所获得的结果。如在临床生化检验项目中，可评价样本检出值与相应正常值之间的异同及其临床意义。 二、仪器操作 （一）刻度吸量管： 1．选择：使用前应根据需要选择适当的吸量管，其总容量最好等于或稍大于取液量，同时必须看清楚吸量管的刻度读数，以免弄错。 2．执管：用拇指及中指持住吸量管的上部，用食指堵住管口及控制流量，刻度数字要向着自己。切忌用大拇指堵住管口，控制流量。 3．量取溶液：左手持洗耳球，将吸量管的尖端插入所量取试剂液面下1cm处。用洗耳球的下端出口对准吸量管上口，将液体轻轻吸上，眼睛注视上升液面，当液面上升至所需取量稍高一些刻度时，立即用右手食指按紧管口。 4．调准刻度：吸管从溶液中取出后（如标准溶液或粘性较大的液体）都必须用小滤纸片将吸管尖端外部溶液擦干。然后用食指控制流量，使液面缓慢下降至所需刻度时（此时，液体弯月面底部、刻度和视线同在一水平线上），右手食指立即按紧吸管上口，使液体不再流出。 5．放出溶液：将吸量管转移至盛所取溶液的容器内，让吸管尖端接触受器内壁，但不能插入受器内原有液体之中，以免污染吸管及试剂。稍稍松动右手食指，使液体自然流出。放液后吸管尖端残留的液体是吹出或不吹出，则视选用吸量管种类要求而定。 （二）微量移液器： 1．使用方法： （1）将吸嘴（Tip头）装在吸液杆上，应套牢避免间隙。 （2）依据所需容量旋转“手轮”，使“数轮”显示所需值。 （3）轻轻地