20132014学年高二生物课件22《动物细胞工程》2（新人教版选修3）.pptVIP

黑面绵羊去核卵母细胞 白面绵羊乳腺细胞核 a 重组细胞 电脉冲刺激 早期重组胚胎 b 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 1、写出AB所代表细胞工程名称：a表示： b表示: 2、实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用卵母细胞的原因： 体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 3、多利面部毛色是： 根据遗传学原理说明判断依据。 4、若黑面绵羊的基因型为AA,白面绵羊的基因型为aa，则克隆羊的基因型为 核移植 胚胎移植 白色 多利全部的核基因都来自白面绵羊 aa ◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？ ◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？ ◆激活方法： ◆激活目的： ◆促融方法：电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 2.）核移植流程 供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养） 1、体积大，易操作。 2、含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 有人说它三个母亲，对吗？ 核移植流程: 1、供体细胞的采集与培养 5、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂进程。 6电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎。 4、将供体细胞注入去核卵母细胞 3、显微操作去除卵母细胞中的核 2、受体卵母细胞的采集与体外培养 7、胚胎移植入代孕母牛体内 8、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。 4、体细胞核移植技术的应用前景 5、体细胞核移植技术存在的问题 看书P49-50页 动物细胞融合与单克隆抗体 1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 一、动物细胞融合 ◆细胞杂交：不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 ◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 动物细胞融合 2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 二：动物细胞融合的成功应用 ——单克隆抗体的制备 思考 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 1、动物特异性免疫 2、分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 3、细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 4、第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 5、第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 6、选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。