【2016年】非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用【临床医学论文】.docVIP

临床医学论文-非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用 ?????????????????? 作者：赵学铭，刘易欣，倪春生，赵秀兰，孙 涛，古强，孙保存 【关键词】? ,间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养, ??? ［摘要］? 目的? 研究与恶性黑色素瘤细胞进行非接触式共培养的间充质干细胞表型变化，从而明确非接触式共培养体系可以应用于两种细胞之间相互作用的研究。??? ??? 方法? 利用Transwell进行非接触式共培养，分析间充质干细胞形态变化，利用免疫组织化学与免疫荧光检测其Ⅷ因子和CD34表达。??? ??? 结果? 间充质干细胞在非接触式共培养体系中可以被恶性黑色素瘤细胞诱导为多角形或短梭形，同时Ⅷ因子和CD34表达上调。??? ??? 结论? 初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的间充质干细胞中部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。??? ??? ［关键词］? 间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养??? ?????? ??? Primary application of in vitro cell research by indirect coculture system????????????? ［Abstract］? Objective? To study the phenotype change and interactions of mouse bone marrowderived mesenchymal stem cells induced by B16, a mouse malignant melanoma cell line.??? ??? Methods? Indirect coculture was based on transwell system to analyse the phenotype change of MSC. Determination of the expression of? Ⅷ factors and CD34 by immunohistochemistry and immunofluorescence.??? ??? Results? MSC was form in polygon and fusiform induced by B16. Then the immunohistochemistry and immunofluorescence staining show Ⅷ factors and CD34 was upregulation of MSC. ??? ??? Conclusion? The results of the indirect coculture experiments with B16 cell and MSC in vitro can initially confirm that parts of the MSC transform their phenotype, it means that indirect coculture system may used in cell interaction research in vitro.??? ??? ［Key words］? mesenchymal stem cells; malignant melanoma; indirect cocuuture?????? ??? ??? 间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）是指存在于骨髓基质中的非造血组织的另一类重要的干细胞，它最显着的生物学特征是既有自我更新的能力，又具有向多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化的潜能［1,2］。它有着广泛的来源，包括骨髓、骨骼肌、软骨、骨、肌腱等，故在干细胞研究领域中具有突出的优势及非常重要的理论研究意义和临床应用价值。??? ??? 笔者希望通过进行MSC细胞和恶性黑色素瘤细胞的非接触式共培养，观察不同培养条件下的MSC形态，检测多种指标免疫组织化学染色结果、分析差异，初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的MSC中部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。??? ??? 1? 材料与方法??? ??? 1.1? 实验动物? 小鼠源性间充质干细胞，天津医科大学病理教研室。小鼠源性恶性黑色素瘤细胞B16细胞系，环湖医院细胞室。??? ??? 1.2? 主要实验试剂? CD34，兔抗小鼠IgG多克隆抗体，Santa cruz公司，货号SC-9095。Ⅷ因子，兔抗小鼠IgG多克隆抗