遗传标记-PCR的原理及其应用.pptVIP

PCR技术的产生 PCR技术的原理 PCR原理类似于DNA的体内复制。 PCR的原理 特异性强：引物与模板DNA按照碱基互补配对原则结合，耐热DNA聚合酶使整个反应可在较高温度下进行，结合的特异性大大提高。 灵敏度高：理论上可从100万个细胞中检测出1个靶细胞 简便迅速：一个PCR反应约需要2～4小时，扩增产物可直接电泳分析，直观、便捷。 对模板要求低：不需特殊方法分离病毒、细菌或培养细胞，DNA粗制品即可作为扩增的模板 平台效应 “平台效应”：PCR反应中，当引物－模板与DNA聚合酶达到一定比值时，DNA聚合酶催化反应趋于饱和，即PCR反应不再增加。 PCR反应成分 DNA聚合酶 dNTPs 模板 引物 PCR反应系统的组成 10×扩增缓冲液 　 10ul　　　　　　 4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　　　　 引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　　　　 模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　　　　 加双或三蒸水至 　 100ul 10×扩增缓冲液的成分通常含有适量的KCl,