甘草甜素对肾小球硬化早期防护作用实验研究72p.pdfVIP

甘草甜素对肾小球硬化早期防护作用的实验研究 甘草甜素对肾小球硬化早期防护作用的实验研究 摘要 目的；儿童肾瘸综合征(NS)发病机制仍未阐明，此病预后导致肾小球硬化以 致肾功能衰竭。肾小球硬化以肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质(EcM)大量 积聚为特征。TGF81、cTGF和MMPs厂rIMPs等参与肾小球疾病的演变过程， 促进ECM积聚，造成肾小球硬化。因此，阻断参与肾小球硬化的细胞因子和ECM 的积聚是防止肾小球硬化进展的关键。采用免疫学和分子生物学方法，以阿霉素 大鼠肾小球硬化模型为研究对象，观察甘草甜索对TG邛l、CTGF及TIMPl的 作用及其分泌ECM的影响：同时观察甘草甜素对肾小球硬化模型形态学和超微 结构及血液生化变化的影响，提供甘草甜素对肾小球硬化早期防护作用的实验依 据。 细胞外基质饵CM)成分包括：层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(烈)、Ⅳ 1(TGFB 型胶原(ColⅣ)。相关细胞因子如：转化生长因子B 1)、结缔组织生 长因子(c’rGF)和金属蛋白酶组织抑制物．1(TIMP．1)。 方法：采用阿霉素(ADR)两次注射法，建立大鼠肾小球硬化的模型。实 验分为三组，(1)对照组；(2)模型组；(3)治疗组。模型组和治疗组分别于第 二次注射ADR后和第一次注射ADR后每天一次甘草甜素灌胃，并于第二次注 射ADR后，同时观察2、4、6和8周各项指标的变化。包括①24h尿蛋白定量， ②各组大鼠取肾皮质进行光镜(既、PAs、Masson染色)及电镜等组织病理学 TⅡvIP．1蛋白的表达。④提取肾皮质部的总RNA，采用标准曲线法进行荧光定量 PCR检测肾皮质部TG邛1、CTGF和Tm伸一1的mRNA的表达。 结果： l、24h尿蛋白定量及血液生化的变化 (BUN)和肌酐(Scr)均比对照组明显升高，各时间点水平依次升高，并且有显 甘草甜素对肾小球硬化早期防护作用的实验研究 差异(po．01)。说明动物模型临床表现为肾病综合征，并逐渐加重并发展为肾 功能衰竭。 及血浆白蛋白(Alb)与模型组相比较均有不同程度改善。说明GL在一定程度 上可以降低蛋白尿，改善高脂血症，对肾功能有保护作用。 2、组织病理学变化 增多，4周后系膜细胞出现空泡变性；6周后出现局灶节段性肾小球硬化：8周 后80％肾小球内出现玻璃样变，肾小管萎缩呈肾小球硬化的改变。电镜下超微结 构见系膜细胞增生，线粒体肿胀，足突融合，基底膜部分增宽。6到8周足突融 合加重，核浆比例失常，核内染色质疏松，电子致密物沉积，系膜基质增宽加重， 在ECM中见到丝状的胶原物质。 (2)治疗组，光镜下2周时细胞数目增加不明显，炎’眭细胞浸润轻微。4周 时空泡变性明显轻于模型组。6～8周有部分局灶节段性肾小球硬化；硬化指数高 于对照组(pO．01)，但轻于模型组(po．01)。电镜下可见系膜细胞轻度增生， 线粒体肿胀减轻，足突部分融合，基底膜轻度均匀增厚。6到8周后，足突仍见 部分融合，核浆比例基本正常，核内染色质轻微变化，少量电子致密物沉积，但 系膜基质增宽程度轻于模型组。EcM中丝状胶原物质少于模型组。说明甘草甜 素可以改善肾脏组织的病理学变化，延缓肾小球硬化的进展。 3、ECM和TGFBl、CTGF蛋白的变化 (1)模型组，正常肾小球内LN、FN和ColⅣ为弱阳性表达，随着肾小球硬 化的程度逐渐加重，肾小球内LN、FN和colⅣ蛋白出现强阳性表达；在完全硬 化失去正常结构的。肾小球，则全部被ECM成分LN、FN和ColⅣ所占据。同时 TGFBl和CTGF在肾小球硬化早期为弱阳性表达，4～6周出现强阳性表达：但 TGFB l蛋白表达4周达高峰，而CTGF蛋白表达6周时达高峰。 B (2)治疗组，治疗后LN、FN、ColⅣ、TGF1和CTGF蛋白表达较模型组 B1 有所减轻，但仍高于对照组。说明甘草甜素可以减少EcM的沉积，使TGF 和CTGF蛋白表达卜．降，延缓。肾小球硬化进展。 甘草甜素对肾小球硬化甲期防护作用的实验研究 4、T