常见生理测定用方法-2017年-5-20-新版.docVIP

常见生理指标测定用方法 ――SOD、POD、CAT、可溶性蛋白、叶绿素、电导率、可溶性糖、MDA、脯氨酸、叶片含水量 SOD酶液可用于SOD、POD、CAT、可溶性蛋白指标的测定，即POD、CAT、可溶性蛋白三个指标不用再取叶片。 SOD酶液的提取。每个重复称取去叶脉的叶片组织约0.25g。剪碎放入预先冷却好的研钵中，加入少量(2-3 ml，因总体积只有9 ml，还要冲洗2次)的磷酸缓冲液(0.05 mol/L，PH=7.8)（不加PVP）研磨成匀浆，然后倒入10 ml的带刻度的塑料离心管中（预先洗好晾干），并用此磷酸缓冲液定容到9 ml。在3000转，4℃高速离心机（提前4℃预冷一下，设好4℃后提前空转运行一下）中离心15分钟，将提取的酶液放入置有冰袋的塑料盒中，低温保存，备用。宜用酶液将4个指标当天测完，切记。 实验一 氮蓝四唑(NBT)法测定SOD活力（优先1-用材0.25 g） 实验原理 超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它的反应产物可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。 本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原