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具有不同疏水性的聚阴离子诱导脱辅基细胞色素。和细胞色素。的结构转换 在蓦夫擎博士论文 中文摘要 蛋白质的结构转换(折叠与去折叠)是蛋白质研究的重要领域。蛋白质的 正确折叠是体现其生物功能的基础，也是生物学中最基本和最普遍的自组装模 式。蛋白质肽链在体内如何折叠主要取决于其一级结构和肽链所位于的细胞环 境，一般来说，蛋白质能自发地折叠成具有特定空间结构和生物功能的分子。但 是环境因素的改变会使肽链发生结构转换，也就是说蛋白质采取何种空问结构不 但受肽链自身热力学稳定性的控制，还受到蛋白质分子所处的微环境和动力学过 程的影响。蛋白质的结构转换在生物体内是一个普遍现象，近年来的医学研究发 现，蛋白质在人体内的结构转换和错误折叠会引起严重的疾病；另一方面，重组 蛋白质在大肠杆菌中的高效表达常常导致无活性的变性蛋白质聚集体，即包涵体 的生成。因此，研究蛋白质的折叠机理和发展促使蛋白质复性的方法无论在理论 上还是在应用上都有很重要的意义。 在细胞内，有一类称为分子伴侣(molecular chaperone)的蛋白质分子协助 新生肽链进行正确的非共价键组装。分子伴侣对其靶蛋白并没有特异性识别，本 身不参与最终产物的形成，也不包括控制正确折叠所需要的构象信息，而只是阻 止非天然的多肽链内部或多肽链之间不正确的相互作用。分子伴侣协助蛋白质折 叠的方法为蛋白质复性提供了一个可能性。90年代初，Cleland及合作者报道了 两亲性的合成高分子聚乙二醇(PEG)可以作为蛋白质折叠促进剂。近年来，又 有一些关于高分子作为折叠促进剂的报道。随着高分子科学的迅速发展，已经可 以按照高分子功能性的要求设计和合成出具有指定单体单元结构、链结构、分子 量的多种均聚物、无规共聚物、嵌段共聚物、接枝共聚物等。尤其重要的是，可 以通过分子设计将具有环境响应性质的疏水和亲水的结构单元以不同的组合方 式连接于合成高分子中，它们不但在单分子状态具有可调节和环境响应的结构变 换及疏水一亲水平衡，还能形成可控尺寸的自组装。因此，可以利用不同的合成 高分子研究各种作用力对蛋白质折叠的影响，并寻找合成高分子促进蛋白质折叠 的结构模式。在本论文中，用磺化聚苯乙烯、马来酸一烯烃交替共聚物研究了静 电、疏水作用和氢键对细胞色素c和脱辅基细胞色素c结构的影响。细胞色素c 是一个碱性蛋白质，等电点为pH10．6；脱辅基细胞色素c是细胞色素c的前体 蛋白质，不含辅基血红素，在溶液中以无规卷曲构象形式存在。 论文工作的第一部分研究了磺化聚苯乙烯和脱辅基细胞色素c的相互作用。 龚洁在前期的研究中，发现磺化聚苯乙烯可以诱导脱辅基细胞色素c从无规卷曲 具有不同疏水性的聚阴离子诱导脱辅基细胞色素c和细胞色素c的结构转换 梗算戈擎博士论文 构象折叠为d一螺旋结构。脱辅基细胞色素c的*螺旋含量与磺化聚苯乙烯的分 子量、磺化度、浓度以及溶液的pH、离子强度有关。在此基础上，我用动态光 散射、荧光光谱和原子力显微镜方法对磺化聚苯乙烯和脱辅基细胞色素c的相互 作用进行了进一步地表征。我们发现，滴加磺化聚苯乙烯溶液(THF／}120，50／50， v／v)到水溶液中可以形成纳米粒子，粒子表面的磺酸负电荷使其稳定地分散在 水溶液中；粒径的大小与聚合物浓度和低浓度的盐无关，但随溶液pH的增加而 增加。在酸性和中性溶液中磺化聚苯乙烯和脱辅基细胞色素c发生相互作用形成 复合物粒子，其尺寸与两者的浓度比有关。当磺化聚苯乙烯过量时，富集在复合 物粒子表面的负电荷阻止了粒子的进一步聚集；而当脱辅基细胞色素c过量时， 脱辅基细胞色素c可能促使复合物粒子进一步聚集。以芘为探针的荧光光谱表 明，脱辅基细胞色素c不仅中和了磺化聚苯乙烯粒子表面的负电荷，而且可能插 入其疏水内核，破坏了磺化聚苯乙烯粒子的原始结构，这类似于脱辅基细胞色素 c与磷脂的反应。因此，磺化聚苯乙烯粒子可以部分地模拟磷脂膜的微环境。 论文工作的第二部分研究了马来酸一烯烃交替共聚物对脱辅基细胞色素c结 构转换的影响。马来酸一烯烃交替共聚物的疏水一亲水性可以通过选择不同长度 的疏水侧链和溶液的pH来进行调节，因此是研究静电、疏水和氢键作用对蛋白 质结构转换影“向的一个很好模型。在这里，我选择了马来酸一十四烯交替共聚物 (PTMA)和马来酸一异丁烯交替共聚物(P1MA)来研究对脱辅基细胞色素c 折叠的诱导作用。在p