gdnf和nt3双基因诱导bmscs分化为神经样细胞的实验分析-experimental analysis of gdnf and nt3 double genes inducing bms cs to differentiate into nerve-like cells.docx

参考文献..............................................................................................................35第三部分 BMSCS 分化前后电生理特性的变化 431. 前言 .............................................................................................................433．方法 ............................................................................................................454.结果 ...............................................................................................................485．讨论 ............................................................................................................49参考文献..............................................................................................................52综 述.......................................................................................................................57附录.........................................................................................................................72致谢…………………………………………………………………………………..73GDNF 和 NT-3 双基因诱导 BMSCs 分化为神经样细胞的实验研究中文摘要第一部分 SD 大鼠 BMSCs 的培养和鉴定摘要目的：建立体外培养扩增、检测鉴定 SD 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法，观察其生物学特性；方法：采取全骨髓培养法分离和纯化大鼠 BMSCs，用显微镜观察细胞形体， 用流式细胞仪检测细胞纯度，观察 BMSCs 在诱导条件下向成骨细胞分化的能力；结果：全骨髓培养法培养的 BMSCs 具有良好的贴壁性，流式细胞仪检测： CD44(96.49%)、CD90(95.63%)、CD45(0.64%)、CD34(0.39%)；第 3 代细胞经诱导剂诱导可向成骨细胞分化；结论：本实验用全贴壁筛选法培养出高纯度的 BMSCs，增殖稳定，在条件诱导下具有多分化的潜能。关键词：大鼠；骨髓间充质干细胞；细胞培养第二部分 GDNF、NT-3 双基因转染促进大鼠骨髓间充质干细胞向神 经样细胞分化摘要：目的：利用 GDNF 和 NT-3 双基因转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞，为其治疗神经性疾病提供实验基础；方法：全骨髓法分离培养 BMSCs，流式细胞术及成骨诱导预实验检测 BMSCs 纯度及特性。转染 GDNF 和 NT-3 双基因后，在显微镜下观察细胞形态变化；利 用 RT-PCR 和免疫荧光检测神经细胞特异性标志物表达；结果：BMSCs 能在体外成功分离培养，诱导分化后，BMSCs 胞体变圆，伸 出明显突起，并可见多数细胞相互交织成网状结构，呈神经细胞样形态。RT-PCR 检测 GDNF、NT-3、NSE、nestin、MAP-2 基因表达，免疫荧光标记检测可见表 达 MAP-2 和 GFAP；结论：GDNF 和 NT-3 双基因修饰诱导的 BMSCs 可分化为神经样细胞，并表达神经元的标志，为基因治疗神经系统疾病如先天性巨结肠提供实验基础。关键词：GDNF；NT-3；诱导分化；神经样细胞第三部分 BMSCs 分化前后电生理特性的变化摘要 目的：本研究利用膜片钳技术，比较 MSCs 及诱导后神经样细胞之间 通道电流的情况，进一步确认分化后神经样细胞的电生理功能，将为肠神经系统 缺如疾病的治疗提供前期工作基础。方法：应用膜片钳技术，采用全细胞记录方式，对由 GDNF 和 NT-3 双基因诱导的分化前 BM