glp1及其类似物对高糖环境下人脐静脉内皮细胞功能的保护作用及可能机制-protective effect and possible mechanism of gl p1 and its analogues on human umbilical vein endothelial cell function in high glucose environment.docx

目录缩略词表……………………………………………………………………………3中文摘要……………………………………………………………………………4英文摘要……………………………………………………………………………7前言…………………………………………………………………………………10材料和方法…………………………………………………………………………13结果…………………………………………………………………………………29讨论…………………………………………………………………………………45结论…………………………………………………………………………………50参考文献……………………………………………………………………………51致谢…………………………………………………………………………………57综述…………………………………………………………………………………582英文缩写中英文缩略词表英文全称中文全称HUVECs FBSECGSHumanUmbilicalVeinEndothelialCells FetalBovineSerumEndothelial CellGrowthSupplement人脐静脉内皮细胞胎牛血清内皮细胞生长添加剂PBS GLP-1DPP-IVPhosphateBuffered Saline Glucagon-like Peptide-1DipeptidylPeptidaseⅣ磷酸盐缓冲液胰高血糖素样肽-1二肽基肽酶ⅣROS RNSNOReactiveOxygenSpecies ReactiveNitrogenSpeciesNitricOxide活性氧簇活性氮族一氧化氮eNOS DAPIAPSEndothelial NitricOxideSynthase 4,6-diamidino-2-phenylindoleAmmoniumPersulfate内皮型型一氧化氮合酶4,6-二脒基-2-苯基吲哚过硫酸铵SDSPI3K/Akt NF-κBSodiumDodecylSulfonate Phosphatidyl Inositol-3-kinase/AktNuclearFactorKappaB十二烷基硫酸钠磷脂酰肌醇3-激酶/Akt核因子κBAGES RAGEGLO-1AdvancedGlycation End-products AdvancedGlycation End-productsReceptorGlyoxalase -1糖基化终末产物糖基化终末产物受体乙二醛酶-13GLP-1 及其类似物对高糖环境下人脐静脉内皮细胞功能的保护作用及可能机制目的：本课题拟探讨高糖诱导内皮细胞功能紊乱的机制，在进行高糖培养前用胰高血糖素样肽-1（glucagon-likepeptide-1，GLP-1）及其受体激动剂Exendin-4 预处理，观察其对高糖培养的原代人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalvein endothelialcells，HUVECs）内皮功能紊乱的影响，并进一步探讨其与氧化应激、磷脂酰肌醇3-激酶/Akt（phosphatidylinositol-3-kinase/Akt，PI3K/Akt）信号通路、乙二醛酶-1（glyoxalase – 1，GLO-1）及糖基化终末产物（advancedglycationend-products，AGES）等的关系。方法：（1）从健康孕妇剖宫产新生儿脐静脉中分离原代HUVECs，培养于含内皮细胞生长添加剂（endothelialcellgrowthsupplement，ECGS）的M199 培养基中，取生长状态良好的第3-5代细胞用于后续实验。实验分组：正常对照组（C组），不做任何处理；高糖处理组（HG组），30mMD-葡萄糖培养；GLP-1 干预组（G+HG组），按HG组条件处理前按需加入GLP-1100nM预处理1h；Exendin-4 干预组（El+HG组及E2+HG组），按HG组条件处理前分别按需加入Exendin-4100nM或200nM干预1h。（2）检测细胞上清中漏出的乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）酶活性，进行细胞毒性作用定量分析。（3）一氧化氮（nitricoxide，NO）荧光探针检测细胞内NO产量，RealTimePCR检测一氧化氮合酶（endothelialnitricoxidesynthase，eNOS）mRNA表达水平，Western Blot检测eNOS蛋白表达水平，体现内皮细胞功能状态。（4）检测细胞内活性氧族（reactiveoxygenspecies，ROS）水平、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）活力反映细胞内氧化应激状态，化学发光法检测细胞内ROS，黄嘌呤氧化酶法检