gnrhi主动免疫对犬生殖机能的影响-effect of gnrhi active immunization on reproductive function in dogs.docx

摘要促性腺激素释放激素 I （Gonadotrophin releasing hormone，GnRH-I）是下丘脑合 成、分泌的十肽，它和脑垂体促性腺激素分泌细胞的特异性受体结合后刺激促性腺激 素的产生和释放，起着调节生殖活动的作用。GnRH-I 主动免疫动物，机体产生 GnRH-I 抗体中和内源性的 GnRH-I，从而抑制动物的生殖。因此，GnRH-I 主动免疫可作为生 育调节的方法，具有抑制生殖内分泌、生殖器官发育等功能，可用于动物去势、避孕、 终止妊娠。目前国内外学者用 GnRH-I 主动免疫对猪、牛、羊等的生殖机能和生产性 能的影响进行了广泛研究，但在犬方面的研究却鲜有报道。鉴于本实验室已研制出 GnRH-I 疫苗，在猪、兔和鼠等动物显示了很强的免疫原性。本实验以犬为研究对象， 研究该疫苗对其生殖功能的影响，为该疫苗将来的广泛应用和推广提供科学的理论依 据。选取健康犬 12 只（雄犬 6 只，雌犬 6 只），年龄相近（3 月龄），体重 3.0～4.0kg， 且发育正常。将 6 只雄、雌犬分别随机分成两组，每组 3 只，即对照组（n=3）与免 疫组（n=3）。犬 4 月龄时，称取麦芽糖结合蛋白—促性腺激素释放激素六聚体（maltose binding protein - gonadotropin releasing hormone I hexamer， MBP-GnRH-I6） 1.5mg 溶于 3mL 生理盐水，用等体积的 Al(OH)3 佐剂充分乳化后给每头试验组犬颈部肌肉 注射 2mL 作为初始免疫，6 周后加强免疫。试验期间，雄、雌犬每月采血一次，200×g 离心 20 分钟提取血清，将血清保存在-20℃冰箱中，以备激素含量测定。7 月龄时， 手术摘取免疫组与对照组的犬睾丸与卵巢，并称重，测量睾丸与卵巢大小。然后用 10%甲醛固定睾丸和卵巢组织，常规石蜡切片，厚度为 5μm，苏木精-伊红（HE）染 色，光学显微镜下观察并拍照。结果表明：免疫组雄犬的睾丸重量、直径、横径、纵周长与横周长、血清睾酮水 平与对照组相比差异显著(P0.05)。免疫组雌犬的卵巢重量、直径、横径与周长、血 清中雌二醇浓度均显著低于对照组(P0.05)。组织切片显示免疫组雄犬的睾丸曲精小 管的管壁附近有一、二层退化的精原细胞且排列稀疏，管腔内空荡，睾丸间质细胞也 明显减少，没有精子，而对照组雄犬睾丸的曲精小管内的精原细胞逐渐向管腔方向发 育，明显分化成精母细胞、精子细胞和精子，并且细胞排列紧密。免疫组雌犬的卵巢 可见有大量的闭锁卵泡，而对照组卵巢内可以看到大量的原始卵泡、初级卵泡和次级 卵泡。根据本试验的结果可得到以下结论：MBP-GnRH-I6 主动免疫抑制睾丸卵巢的生 长发育，降低了血清睾酮与雌二醇浓度，精子发生与卵泡发育受到抑制，睾丸与卵巢 萎缩。表明 MBP-GnRH-I6 对犬具有很强的免疫原性。关键词：GnRH-I，主动免疫，犬，生殖机能AbstractGonadotropin releasing hormone I (GnRH-I), a decapeptide is synthesized and secreted by hypothalamus, which stimulates the produce and release of the gonadotropin, in combination with the specific receptor of gonadotropin secretory cells in the pituitary gland, thus regulates the reproductive activities. Active immunization against GnRH-I can produce the GnRH-I antibody which neutralize the /search?q=endogenicamp;keyfrom=E2Ctranslationendogenic GnRH-I, which can inhibit the reproductive function of animal. Many studies showed that active immunization against GnRH-I could be used to restrain reproductive endocrine, reproductive organ development etc. So it can be used for immunocastration, contraception and termination of pregnancy in animals.